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FITC-Brdu細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 11:47:21瀏覽次數:156次

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貨號 FS-X9594
FITC-Brdu細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)正在熱銷的產品:濾紙mei測試盒 規格:100管/48樣 測試方法:微量法
濾紙mei測試盒 規格:50管/24樣 測試方法:可見分光光度法
β-葡萄糖醛suanmei(β-GD)試劑盒 規格:100管/96樣 測試方法:微量法
β-葡萄糖醛suanmei(β-GD)試劑盒 規格:50管/48樣 測試方法:可見分光光度法
葡萄糖脫氫

中文名稱:FITC-Brdu細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

英文名稱:BrdU cell proliferation Detection Kit

產品規格:20T

貨號:FS-X9594

產品介紹:

本試劑盒細胞增殖檢測是一個基于熒光檢測的實驗,可以監測細胞健康和通過胸苷摻合來估量DNA 合成從而監測細胞分裂。

溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類似物。BrdU 通常被用于檢測活組織中再生的細胞。

BrdU 可以摻合到復制細胞中新的合成DNA 中(在細胞周期S 期),在DNA 復制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特異性抗體便可以用于檢測這個插入的化學品,從而檢測出細胞是否在復制其DNA。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

外切mei體成分8(EXOSC8)檢測試劑盒  forExosomeComponent8(EXOSC8)    

骨調蛋白(OMD)檢測試劑盒  forOsteomodulin(OMD)    

己糖激mei1(HK1)檢測試劑盒  forHexokinase1(HK1)    

促卵泡su(FSH)檢測試劑盒  forFollicleStimulatingHormone(FSH)    

過氧化還原mei4(PRDX4)檢測試劑盒  forPeroxiredoxin4(PRDX4)    

高香草suan(HVA)檢測試劑盒  forHomovanillicAcid(HVA)    

張力蛋白3(TNS3)檢測試劑盒  forTensin3(TNS3)    

抗神經元核抗體2型(ANNA2)檢測試劑盒  forAnti-NeuronalNuclearAntibody2(ANNA2)    

白介su6(IL6)檢測試劑盒  forInterleukin6(IL6)    

巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP1α)檢測試劑盒  forMacrophageInflammatoryProtein1Alpha(MIP1a)    

肝癌源性生長因子(HDGF)檢測試劑盒  forHepatomaDerivedGrowthFactor(HDGF)    

胰島su樣生長因子1(IGF1)檢測試劑盒  forInsulinLikeGrowthFactor1(IGF1)    

表面活性物質關聯蛋白B(SPB)檢測試劑盒  forSurfactantAssociatedProteinB(SPB)    

/氫交換因子1(NHE1)檢測試劑盒  forSodium/HydrogenExchanger1(NHE1)    

胱天蛋白mei3(P3)檢測試劑盒  forCaspase3(P3)    

葡萄糖磷suan變位mei5(PGM5)檢測試劑盒  forPhosphoglucomutase5(PGM5)    

白介su1受體Ⅱ(IL1R2)檢測試劑盒  forInterleukin1ReceptorTypeII(IL1R2)    
FITC-Brdu細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)比沙標準品  規格:125mg  英文名稱:Bisacodyl

氨基己suan標準品  規格:200mg  英文名稱:Aminocaproic Acid

lv化乙酰標準品  規格:200mg  英文名稱:Acetylcholine Chloride

suan酐標準品  規格:100mg  英文名稱:Creatinine

lv舒隆標準品  規格:200mg  英文名稱:Clorsulon

L-酪氨suan標準品  規格:500mg  英文名稱:L-Tyrosine

碘帕chun相關物質A標準品  規格:50mg  英文名稱:

碘帕chun標準品  規格:200mg  英文名稱:Iopamidol

噴丁標準品  規格:250mg  英文名稱:Gabapentin

一水合標準品  規格:50mg  英文名稱:Morphine Monohydrate CII (AS)

 


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