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當前位置：上海撫生實業有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> PKH67/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒
| 貨號 | FS-X9714 |
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產品介紹:
PKH67/PI 雙染細胞毒性檢測試劑盒是利用細胞熒光染料PKH67和PI對細胞進行染色，利用PKH67標記靶細胞，PI標記死的靶細胞來區分不同的細胞，活的靶細胞成綠色，死的靶細胞成紅色和綠色，從而檢測細胞毒性作用。 根據不同的實驗方案設計，可以用來檢測化合物的細胞毒性作用。也可以用來檢測殺傷性T 細胞或NK 細胞介導的細胞毒作用。 熒光染料PKH67是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞，通過與膜結構的脂質分子結合而標記細胞。對細胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，有著強而穩定的綠色熒光。經PKH67標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。 在細胞分裂增殖過程中，PKH67的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。PKH67標記細胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，PKH67標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次(1/2的熒光強度)，二次(1/4的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數的細胞。PKH67可檢測分裂次數多達六次甚至更多。 除了用于細胞增殖檢測，PKH67 還可以用于細胞的體外盒體內示蹤，標記后熒光在胞內表達穩定，陽性標記率達98%以上，標記細胞形態良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導分化情況；或將標記的細胞注入體內，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。 PKH67標記的細胞用于體內觀察可以長達數周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。PKH67 毒性較小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患。可以更快速，更準確和更安全地得到想要的實驗數據。 PKH67/PI標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞毒性檢測。 PKH67標記細胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502 nm。流式檢測時的激發波長可以選擇488nm，此時的發射波長為502nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。PI標記細胞呈紅色熒光，流式檢測時的激發波長可以選擇488nm，此時的發射波長為647nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL2 detection channel。 PKH67標記的細胞除了流式細胞儀檢測細胞毒性外，還可單染后用于細胞增殖檢測，或者用熒光酶標板定量活細胞數目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。 儲存條件：-20℃避光保存。 |
中文名稱：PKH67/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒
英文名稱：
產品規格：500T
貨號：FS-X9714
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
骨成型蛋白7(BMP-7)英文名：BMP-7 聚集蛋白抗體包裝100g
骨成型蛋白4(BMP-4)英文名：BMP-4 轉錄因子AP2α+β抗體包裝25g
骨成型蛋白2(BMP-2)英文名：BMP-2 磷化腺瘤樣息肉抗體包裝5g
骨成型蛋白15(BMP-15)英文名：BMP-15 磷化周期末期促進復合蛋白APC1抗體包裝25g
骨保(OPG)英文名：OPG 周期后期促進蛋白亞基10抗體包裝5g
骨保護配體(OPGL)英文名：OPGL 周期后期促進蛋白亞基11抗體包裝25g
骨保護(OPG)英文名：OPG 腺瘤性結腸息肉病蛋白2抗體包裝5g
過氧化(GSH-Px)英文名：GSH-Px 磷化分裂周期蛋白16抗體包裝1g
谷脫羧自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)英文名：GAD-Ab-IgM DNA修復相互作用蛋白抗體包裝5g
谷脫羧自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)英文名：GAD-Ab-IgG 脂肪膜相關蛋白抗體包裝1g
谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)英文名：GAD-Ab 載脂蛋白A1結合蛋白抗體抗體包裝25g
谷脫氫(GDH/GLDH)英文名：GDH/GLDH 載脂蛋白B-mRNA編輯復合物1抗體包裝5g
孤腓肽(OFQ/N)英文名：OFQ/N 載脂蛋白B-mRNA編輯復合物2抗體包裝1g
鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)英文名：Lep IgG 載脂蛋白B-mRNA編輯復合物3B抗體包裝1g
睪(Testoterone)英文名：Testoterone 載脂蛋白B-mRNA編輯復合物3C抗體包裝5g
芳香基硫酯H抗體轉鐵蛋白(TRF)Raltitrexed is a thymidylate synthase inhibitor with an IC50 of 9 nM for the inh
PKH67/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒腐皮殼 1-(烯酰氧基)-3-(甲基烯酰氧基)-2-(含穩定劑甲氧基)骨特異性堿性磷酸B
銹色桿孢囊 二氫獼猴桃內酯骨退化特異標志物
灰葡萄孢（灰霉病） 2-三氟甲基-4-羥基吡啶骨涎蛋白
毛榛畢赤酵母 1-Boc-吡咯烷-3-甲酸乙酯瓜氨酸
釀酒酵母 N-CBZ-4-乙酸甲酯寡克隆區帶
蠟磨屬 N,N-雙(4-甲氧基芐基)胱硫β-合成
釀酒酵母 3,5-二氟-4-甲過氧化還原1
大腸埃希氏 5-羥基喹喔啉過氧化還原4
金針菇（毛柄、冬菇） 鄰羥基肉桂酸乙酯（順反混合物）過氧化氫
葡萄鏈格孢* 4-(-1-基)甲酸叔丁酯過氧化氫
焦曲霉 N-芐基吡咯烷-3-甲酸甲酯過氧化物還原2
粘質沙雷氏 2-溴-3,4-二氟過氧化物體增殖物激活受體γ
Methylobacterium 3-芐氧基溴芐過氧化物體增殖物激活受體γ輔激活子1α
嘴突凸臍蠕孢 3-芐氧基苯甲過氧化脂質;乳過氧化物
球毛殼 1-BOC-4-(4-氨基苯基)還原型
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