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鞭毛染色液(Leifson法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 16:04:42瀏覽次數:173次

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貨號 FS-X10115
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中文名稱:鞭毛染色液(Leifson法)

英文名稱:

產品規格:3×50ml

貨號:FS-X10115

產品介紹:

用途:

鞭毛染色

注意事項:

又叫利夫森氏染色法,主要由鞣酸、堿性品紅等組成,染色后菌體和鞭毛呈紅色。

儲存條件:室溫,避光,12個月

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

灰黃青霉DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體Human MSC(Musculin) 人B受體相關蛋白31(BCAP31)免疫試劑盒

谷棒桿菌磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體Human CENPU (Centromere protein U) 人B生長因子(BCGF)免疫試劑盒

釀酒酵母上皮粘附分子抗體Human MKL2 (MKL/myocardin-like protein 2) 人B淋巴瘤因子6(Bcl6)免疫試劑盒

香菇屬酪蛋白激受體B2抗體Human MOAP1 (Modulator of apoptosis 1) 人B淋巴瘤-XL(Bcl-xl)免疫試劑盒

少孢酵母表皮生長因子抗體Human MAZ (Myc-associated zinc finger protein) 人B連接蛋白(BLNK)免疫試劑盒

*雞油菌都不能訂購表皮生長因子受體3抗體Human MOB2 (MOB kinase activator 2) 人B活化因子受體(BAFF-R)免疫試劑盒

突臍蠕孢菌酪蛋白激A4受體抗體Human MDGA1 (MAM domain-containing glycosylphosphatidylinositol anchor protein 1) 人B活化因子(BAFF)免疫試劑盒

雀黃鏈霉菌上皮鈣粘附分子抗體Human MPHOSPH10 (U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein MPP10) 人Bκ 輕肽基因增強子核因子抑制因子ε(NFKBIE)免疫試劑盒

鏈格孢紅生成受體抗體Human PRX(Periaxin) 人B群鏈球菌多糖抗體(IgG)免疫試劑盒

克魯斯假絲酵母腦啡肽抗體Human MKX(Homeobox protein Mohawk) 人B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫試劑盒

楊齒白木層孔菌EID2蛋白抗體Human MARCO (Macrophage receptor MARCO) 人B淋巴抗原(CD20)免疫試劑盒

大腸桿菌上皮粘附分子抗體Human  MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) 人blca-4 免疫試劑盒

淡紫擬青霉紅膜相關蛋白ERMAP抗體Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) 人blca-1 免疫試劑盒

菜豆間座殼腺樣癌特異性相關抗原EMC1抗體Human SEMG1(Semenogelin-1) 人Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)免疫試劑盒

擬粉紅鎖擲孢酵母腺樣癌特異性相關抗原EMC1抗體Human MAD1L1(Mitotic arrest deficient 1-like protein 1) 人B7-H4 免疫試劑盒

斯氏梭菌硫軟骨蛋白多糖3抗體Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) 人A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)免疫試劑盒

綠色木霉Trichoderma│viride 質量規格:100μg/ml,u=3%華蟾酥基

熒光假單胞菌生物型FPseudomonas│fluorescens biotype F 質量規格:分析標準品木蘭脂

多噬伯克霍爾德氏菌Burkholderia│multivorans 質量規格:分析標準品,≥99.5%(GC)異飛薊賓
鞭毛染色液(Leifson法)秀珍菇 2-氟苯頻呢酯香豆-3-羥化

黑曲霉 3--2-中性轉化

氣微 4'-羥基-3'-乙酮堿性磷

枯草芽孢桿 4,6-二-5-嘧啶羧甘油三酯

綠粘帚霉 反式-4-乙基環己基酮脫氫

*匍枝根霉 5-溴-1H-吡唑[3,4-B]吡啶乙脫氫

黃玫瑰色諾卡氏 2-氟-5-溴吡啶-3-甲蘋果合

冷海水黃桿 3-肼基鹽鹽脯氧化

洋蔥伯克霍爾德 2,6-二-3-基-4-甲基 吡啶氫ATP

扶桑本森頓酵母 2--3-氟苯甲纖維蛋白

粗糙脈孢 5--2-嘧啶合成

解脂亞羅酵母 3,5-二甲黃質脫氫

草菇 [羥基(4-苯丁基)氧膦基]乙芐酯酮脫氫

鹽水球形 3-溴-2-甲氧基苯甲蘋果脫氫

枯草芽孢桿 N,2-二甲基芐蘋果合

 


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