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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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高保真KOD試劑盒

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更新時(shí)間:2022-05-11 14:07:43瀏覽次數(shù):440次

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貨號(hào) FS-X9729
高保真KOD試劑盒正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品:CXCR7/RDC1 表面趨化因子受體7抗體聚二二烯酯 平均分子量 ~700
CCR-8 表面趨化因子受體8抗體聚二烯酯 平均分子量 ~300
CCL25/CCR-9 表面趨化因子受體9抗體聚二烯酯 平均分子量 ~475
CCL28/MEC 粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體聚二烯酯 平均分子量~950
CCR-10 表面趨化因子受體10抗體Mw 400,0

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng):高保真KOD試劑盒

英文名稱(chēng):

產(chǎn)品規(guī)格:50U/200U/1000U

貨號(hào):FS-X9729

產(chǎn)品介紹:

KOD DNA polymerase 是從克隆有α –型高保真DNA聚合酶的大腸桿菌中分離純化所得,具有3`→5`核酸外切酶活性,保真性能比普通Taq聚合酶高80倍。具有較高的延伸速率,在推薦的條件下大于每分鐘2kb,PCR產(chǎn)物為平端,可與直接接入本公司Blunt平端連接載體中。用于高保真、快速擴(kuò)增目標(biāo)DNA,環(huán)拉法引入點(diǎn)突變,補(bǔ)平DNA粘性末端等。

經(jīng)酶切實(shí)驗(yàn)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶污染,PCR方法未檢測(cè)到宿主DNA殘留,能夠有效擴(kuò)增大腸桿菌基因組DNA。

酶活定義:

在推薦的緩沖反應(yīng)體系中,以大馬哈魚(yú)精DNA為模板,68℃、30min內(nèi)合成10nmol核酸所需要的酶量為一個(gè)活性單位。

保存條件:

儲(chǔ)存溶液為:50mM Tris-HCl(pH7.6),50mM KCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,50%(V/V) glycerol,-20℃存放一年,無(wú)明顯活性喪失。冰袋運(yùn)輸 。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

γ干擾受體(IFN-γR)英文名:IFN-γR 芳基硫酯A抗體包裝1g

γ干擾(IFN-γ)英文名:IFN-γ 擬南芥ACA11抗體包裝1g

γ干擾(IFNγ)英文名:IFNγ AHA3抗體(擬南芥)包裝250mg

γ分泌(GACE)英文名:GACE 磷化鈉ATP蛋白a1抗體包裝5g

γ-基丁(GABA)英文名:GABA 磷化凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激1抗體包裝50MG

γ基丁(GABA)英文名:GABA 中性膽固酯解1抗體包裝1g

β抑制蛋白2(ARRB2)英文名:ARRB2 人星形膠質(zhì)抗體包裝5g

β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)英文名:β-TG 縮A抗體包裝100g

β細(xì)胞(BTC)英文名:BTC 膜粘連蛋白6抗體包裝25g

β位淀粉樣前體蛋白裂解1(BACE1)英文名:BACE1 β淀粉樣肽(25-35)抗體包裝500g

β葡萄糖醛苷(βGD)英文名:βGD 血管緊張I抗體包裝1g

β葡糖苷(β-glucosidase)英文名:β-glucosidase 腎上腺髓質(zhì)抗體(N端20肽)包裝250mg

β內(nèi)酰胺抑制劑(BLI)英文名:BLI ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體包裝5g

β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)英文名:β-EPR 精加壓受體2抗體包裝25g

β內(nèi)啡肽(β-EP)英文名:β-EP 凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體包裝5g

磷化蛋白激B抗體基質(zhì)金屬蛋白10(MMP10)RG108 (N-Phthalyl-L-tryptophan) 是一種非核苷的 DNA 基轉(zhuǎn)移 (DNMTs) 抑制劑 (IC50=115 nM),RG10
高保真KOD試劑盒Pontibacter 2-溴芐抗上皮生長(zhǎng)抑制因子

銅綠假單胞 3-氨基-N-甲基芐抗神抗體

釀酒酵母 2-溴-5-羥基苯抗神經(jīng)元核抗體1型;抗Hu抗體

擬革蓋 3-乙抗腎小球基底膜抗體

球孢白僵 3-氟--5-甲抗雙鏈DNA抗體;天然DNA抗體

靈芝 2-(2-溴乙基)-1,3-二氧戊環(huán)抗體球蛋白A

高大毛殼 5-氟-2-甲氧基苯抗天然脫氧核糖核酸抗體

佛雷德里克斯堡假單胞 二苯基乙酰抗纖維蛋白抗體

大腸埃希 3-甲氧基甲酯抗小核糖核蛋白;Sm抗體

金針菇(毛柄、冬菇) 4,7-二滿(mǎn)二酮抗心磷脂IgA抗體

靈芝 鏈脲抗心磷脂IgG抗體

大腸埃希氏 2--4-三氟甲基-嘧啶-甲酸乙酯抗心磷脂IgM抗體

巨大芽孢桿 乙酰酮銪(III)水合物抗信號(hào)識(shí)別顆粒抗體

韓芝 3-溴-5-抗胸腺球蛋白

植物乳桿 2-甲基-3-硝基吡啶抗血小板IgA抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)


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