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貨號(hào)	FS-X10051

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：天青石藍(lán)蘇木素染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml

貨號(hào)：FS-X10051

產(chǎn)品介紹:

用途：

常規(guī)切片HE染色

注意事項(xiàng)：

天青石藍(lán)和明礬蘇木素聯(lián)合使用，天青石藍(lán)溶液中的高鐵銨可加強(qiáng)蘇木素與細(xì)胞核的結(jié)合力，具有抗酸作用，自然氧化需要5個(gè)月成熟。染色時(shí)間一般分別5分鐘。

儲(chǔ)存條件：4℃，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

枯草芽孢桿菌6號(hào)染色體開放閱讀框199抗體Human WNT2(Protein Wnt-2) 人抗EB病抗體(EBV)免疫試劑盒

總狀毛霉7號(hào)染色體開放閱讀框34抗體Human WWC1(Protein KIBRA) 人抗E3泛蛋白連接TRIM21(TRIM21)抗體免疫試劑盒

新疆鹽地桿菌6號(hào)染色體開放閱讀框201抗體Human WIF1(Wnt inhibitory factor 1) 人抗DNAB抗體(anti-DNase B Ab)免疫試劑盒

鏈球菌屬6號(hào)染色體開放閱讀框203抗體Human IFIH1(Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1) 人抗BP180抗體(anti-BP180-Ab)免疫試劑盒

微白螺孢菌6號(hào)染色體開放閱讀框204抗體Human UACA(Uveal autoantigen with coiled-coil domains and ankyrin repeats) 人抗BB抗體(BB-Ab)免疫試劑盒

細(xì)鏈格孢6號(hào)染色體開放閱讀框206抗體Human NUDT1(7,8-dihydro-8-oxoguanine triphosphatase) 人軍團(tuán)菌抗體IgM(LP Ab-IgM)免疫試劑盒

黑曲霉6號(hào)染色體開放閱讀框211抗體Human KIRREL(Kin of IRRE-like protein 1) 人軍團(tuán)菌抗體IgG(LP Ab-IgG)免疫試劑盒

煙曲霉6號(hào)染色體開放閱讀框225抗體Human LYPD3(Ly6/PLAUR domain-containing protein 3) 人軍團(tuán)菌抗體IgA(LP Ab-IgA)免疫試劑盒

乳桿菌屬6號(hào)染色體開放閱讀框25抗體Human MAP1LC3A(Microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3A) 人卷曲螺旋, 肌球蛋白樣BCL2 結(jié)合蛋白/自噬基因Beclin 1(BECN1)免疫試劑盒

側(cè)耳6號(hào)染色體開放閱讀框35抗體Human UACA(Uveal autoantigen with coiled-coil domains and ankyrin repeats) 人卷曲蛋白8(FZD8)免疫試劑盒

戴爾根霉6號(hào)染色體開放閱讀框52抗體Human WIF1(Wnt inhibitory factor 1) 人聚集蛋白(Agrin)免疫試劑盒

第三梭菌6號(hào)染色體開放閱讀框57抗體Human MAP1LC3B(Microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3B) 人巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)免疫試劑盒

棒曲霉6號(hào)染色體開放閱讀框58抗體Human IFIH1(Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1) 人巨噬炎性蛋白5(MIP-5)免疫試劑盒

毛木耳6號(hào)染色體開放閱讀框62抗體Human NUDT1(7,8-dihydro-8-oxoguanine triphosphatase) 人巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)免疫試劑盒

銅綠假單胞菌6號(hào)染色體開放閱讀框70抗體Human KIRREL(Kin of IRRE-like protein 1) 人巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌6號(hào)染色體開放閱讀框72抗體Human FOLR2(Folate receptor beta) 人巨噬炎性蛋白2(MIP-2)免疫試劑盒

鏈格孢霉屬Alternaria│sp. 質(zhì)量規(guī)格：AR1,4,5-三磷肌試劑盒雞屎藤酯

草菇Volvariella│volvacea 質(zhì)量規(guī)格：IND1,3-二磷甘油試劑盒雞屎藤

擬盤多毛孢Pestalotiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格：IND1,25二羥基維生D3試劑盒雞屎藤
天青石藍(lán)蘇木素染色液黑色附球孢 4-甲硫基芐溶血酰基轉(zhuǎn)移2

鼠李糖乳桿 4-基芐食道癌相關(guān)基因2

布蘭克假絲酵母 4-溴化鎂固調(diào)節(jié)因子結(jié)合蛋白1

細(xì)黃鏈霉乳糖變種 2-乙基噻吩乙酰羧化α

蠟狀芽孢桿環(huán)戊CARD結(jié)構(gòu)域的凋亡相關(guān)顆粒樣蛋白

羊泰勒蟲（臨潭株-1） 3-羧基-4-氟苯Crk樣蛋白

巴斯德畢赤酵母碳亞乙烯酯胱抑B

蠟樣芽孢桿 4-氨基-1-叔丁氧羰基催產(chǎn)受體

葡萄座腔甲-次硫氫鈉加合物接觸蛋白2

Myxococcus sp. 3-芐氧基-2,6-二氟苯胱抑A

舒青霉 5-(4-苯氧基丁氧基)補(bǔ)骨脂（PAP-1）VGF神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白2

三孢布拉霉偶氮二甲二叔丁酯延伸蛋白

亞硝鹽對(duì)照液 1-BOC-四氫吡咯δ-促睡眠肽

蕈狀芽孢桿 2-二乙氨基乙烷鹽鹽甲型H1N1流感

蘇云金芽孢桿 (2-溴乙氧基)-叔丁基二甲基硅烷磷二酯5
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)