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IgG,鵝免疫球蛋白GELISA試劑盒技術指導

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更新時間:2024-03-20 10:23:21瀏覽次數:653次

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IgG,鵝免疫球蛋白GELISA試劑盒技術指導用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中鵝免疫球蛋白G(IgG)的含量。

                     IgG,鵝免疫球蛋白GELISA試劑盒技術指導

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中鵝免疫球蛋白GIgG)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包鵝免疫球蛋白GIgG)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鵝免疫球蛋白GIgG)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

需要但未提供的材料 

1. 可在450nm處進行讀數的酶標儀; 

2. 能精確吸取10-200µL的移液器; 

3. 可調多道(8)移液器(50-200µL); 

4. 供可調多道移液器使用的試劑存放槽; 

5. 洗瓶或洗板機; 

6. 蒸餾水或去離子水; 

7. 1升的圓柱形量筒; 

8. 移液器:1和(10或25 mL); 

9. 移液器槍頭; 

10. 紙巾; 

11. 計時器,用以監控溫育步驟; 

12. 處理池和消毒劑(例如:0.5% 次氯酸鈉, 10% 家用漂白水);  

注意事項

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室

溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中

不要讓微孔干燥掉。 

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。 

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。 

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。 

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。 9. 不能使用過期產品。 

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。  

保存: 貯藏于2-8°C。 

標本收集 

1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細胞培養上清液、組織液標本。 

2. 室溫(20-25℃)下保存標本不要超過8小時。2-10℃保存標本,不超過48小時。如

耽擱的時間更長,請在-20℃或更低的溫度下保存標本。標本避免多次凍融,這樣可能會損失蛋白活性,產生錯誤結果。 

準備工作

1. 濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至 500ml)。  

操作步驟 

試劑盒應平衡至室溫(20-25°C )再試驗。     取出所需反應板。 

1. 加入10ul標準品(Standards)、10ul標本于相應反應板孔中。 

2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒,封

住板孔,室溫溫育 45分鐘。 

3. 洗板:甩盡板內液體,用洗滌液洗滌反應板(每孔內加入350ul洗滌液),并去除水滴

(在厚疊吸水紙上拍干);反復洗滌5次。 

4. 每孔加入100ul顯色液, 輕輕混勻10秒,室溫溫育20分鐘。 

5. 每孔加入100ul終止液(Stop Solution)。輕輕混勻30秒;30分鐘內在450nm處讀OD

值。  

以OD值為縱坐標,以標準品濃度為橫坐標,繪制標準曲線。根據樣品的OD值可在標準曲線上查出其濃度。

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