IgG,鵝免疫球蛋白GELISA試劑盒技術(shù)指導

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中鵝免疫球蛋白G（IgG）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被鵝免疫球蛋白G（IgG）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鵝免疫球蛋白G（IgG）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

需要但未提供的材料 

1. 可在450nm處進行讀數(shù)的酶標儀； 

2. 能精確吸取10-200µL的移液器； 

3. 可調(diào)多道（8）移液器（50－200µL）； 

4. 供可調(diào)多道移液器使用的試劑存放槽； 

5. 洗瓶或洗板機； 

6. 蒸餾水或去離子水； 

7. 1升的圓柱形量筒； 

8. 移液器：1和（10或25 mL）； 

9. 移液器槍頭； 

10. 紙巾； 

11. 計時器，用以監(jiān)控溫育步驟； 

12. 處理池和消毒劑（例如：0.5% 次氯酸鈉, 10% 家用漂白水）；  

注意事項

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室

溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 

2. 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中

不要讓微孔干燥掉。 

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。 

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。 

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。 

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。 9. 不能使用過期產(chǎn)品。 

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。  

保存： 貯藏于2-8°C。 

標本收集 

1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織液標本。 

2. 室溫（20－25℃）下保存標本不要超過8小時。2－10℃保存標本，不超過48小時。如

耽擱的時間更長，請在-20℃或更低的溫度下保存標本。標本避免多次凍融，這樣可能會損失蛋白活性，產(chǎn)生錯誤結(jié)果。 

準備工作

1. 濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至 500ml)。  

操作步驟 

試劑盒應平衡至室溫（20-25°C ）再試驗。     取出所需反應板。 

1. 加入10ul標準品(Standards)、10ul標本于相應反應板孔中。 

2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒，封

住板孔，室溫溫育 45分鐘。 

3. 洗板：甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌反應板（每孔內(nèi)加入350ul洗滌液），并去除水滴

（在厚疊吸水紙上拍干）；反復洗滌5次。 

4. 每孔加入100ul顯色液， 輕輕混勻10秒，室溫溫育20分鐘。 

5. 每孔加入100ul終止液（Stop Solution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD

值。  

以OD值為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線。根據(jù)樣品的OD值可在標準曲線上查出其濃度。