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ELISA試劑盒這些實驗訣竅你知道多少

時間:2018-2-5閱讀:198
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ELISA試劑盒免疫酶技術便是用酶(如辣根過氧化物酶)符號已知抗體(或抗原),然后與組織標本在必定條件下反應,假如組織中含有相應抗原(或抗體),抗原抗體互相聯絡構成的復合物中所帶酶分子遇到底物時,能催化底物水解、氧化或恢復,發作顯色反應,這么就可以識別出標本抗原(抗體)分布的方位和性質,通過圖像分析并可抵達定量的目的。
ELISA試劑盒免疫酶技術與免疫熒光技術
免疫熒光技術雖已廣泛應用于免疫學的研討與確診,可是熒光抗體染色標本不能*保存,對組織細胞的纖細結構分辯不清,免疫酶技術則能打敗上述缺少,符號免疫酶技術的敏感性更優于免疫熒光法,對白臘切片標本尤為適用,為免疫病理研討拓荒了一條新途徑,酶顯色產品具有較高的電子密度,通過恰當處理還可以進行免疫電鏡調查,免疫酶組化技術分為酶符號法與非符號抗體技術,前者是將酶通過交聯劑聯絡在抗體分子上,構成酶符號抗體。后者是將酶作為抗原與相應的特異性抗體聯接進行的免疫反應,稱為非符號抗體酶技術。
ELISA試劑盒免疫酶技術運用酶催化底物反應的生物擴展效果,前進特異性抗原-抗體免疫學反應檢查敏感性的一種符號免疫技術。該技術所用的酶請求純度高、催化反應的轉化率高、專一性強、性質安穩、來歷豐盛、報價不貴、制備成的酶標抗體或抗原性質安穩,繼續保存著它的活性部分和催化才干。在受檢標本中不存在與符號酶相同的酶。其他它的相應底物應易于制備和保存,報價低價,有色產品易于測定,光吸收高。
ELISA試劑盒固相載體選用免疫酶技術
免疫酶技術的首要試劑為固相的抗原或抗體、酶符號的抗原或抗體和與符號酶直接相關的酶反應底物。可作固相載體的物質很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的功用,抗體或蛋白質抗原吸附其上后保存正本的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種方法,在測定進程中,它作為載體和容器,不參與化學反應,加之它的報價低價,所以被遍及選用。
聚苯乙烯載體的形狀首要有三種:小試管、小珠和微量反應板。小試管的特色是還能兼作反應的容器,終究放入分光光度計中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,外表經磨砂處理后吸附面積大增加。如用特其他洗刷器,在洗刷進程中使圓珠翻滾淋洗,效果十分好。zui常用的載體為微量反應板,于ELISA測定的產品也稱為ELISA板,用的標準板形是8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢查,有制成8聯或l2聯孔條的,放入座架后,大小與標準ELISA板相同。ELISA板的特色是可以一同進行大量標本的檢查,并可在特定的比色計上敏捷讀出效果。現在已有多種自動化儀器用于微量反應板型的ELISA檢查,包括加樣、洗刷、保溫、比色等過程,對操作的標準化極為有利。
出色的ELISA板應該是吸附功用好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間功用鄰近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不相同和制作工藝的不相同,各種產品的質量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯制品在運用前須檢查其功用。常用的檢查方法為:以必定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔內參與恰當稀釋的酶標抗人IgG抗體,保溫后洗刷,加底物顯色,中止酶反應后分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件,使各讀數在0.8左右。核算全部讀數的均勻值。全部單個讀數與均勻讀數之差應小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯板的特色為質軟板薄,可切開,價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質的吸附功用比聚苯乙烯高,但空白值有時也略高。
為比較不相同固相在某一ELISA測定中的好壞,可用以下方法加以查驗:用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和一個典型的陰性標本。將它們分別進行一系列稀釋后,ELISA試劑盒在不相同的固相載體上按預定的ELISA操作過程進行測定,然后比較測定效果。在哪一種載體上陽性效果與陰性效果區別zui大,這種載體便是這一ELISA測定的zui合適的固相載體。
ELISA試劑盒除塑料制品外,固相酶免疫測定的載體還有兩種材料:一是微孔濾膜,如**纖維素膜、尼龍膜等,這類測定方法將在本章“膜載體的酶免疫測定"中介紹。另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的,反應時固相微粒懸浮在溶液中,具有液相反應的速率,反應結束后用磁鐵招引作為分其他手法,洗刷也十分便當,但需配備特其他儀器。 

 

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