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產品介紹：

RAPA3G SYBR Green qPCR Mix本制品是采用 SYBR Green 嵌 合 熒 光 法 進 行Real-Time PCR 的專用試劑，本 SYBR Green qPCR Mix將化學修飾的熱啟動 RAPA3G DNA 聚合酶、反應 Buffer、dNTP、SYBR Green 染料等試劑預混在一起，是一種 2×濃度的單組分預混試劑。該制品配有單獨的 ROX 內參染料，可用于需要 ROX 進行孔間校正的定量 PCR 儀。RAPA3G DNA 聚合酶為第三代 DNA 聚合酶，其具有最高的雜質耐受性（對乙醇、胍鹽、肝素具有高的耐受性），因此對于純度較差的 DNA 模板，該 Mix 仍然可以獲得理想的實驗結果。RAPA3G DNA 聚合酶為化學法修飾的 HotStart版本，其在 50℃以下 100%無活性，只有 95℃條件下加熱5min 后才能恢復酶的活力。因此該系統可以有效抑制非特異性 PCR 擴增，極大的提高了 PCR 擴增特異性。該試劑盒的反應緩沖液，可在寬范圍中得到良好的擴增結果、檢測靈敏度更高、信號更強。
包裝
規 格
2×RAPA3G SYBR
Green qPCR Mix
50×ROX Dye
1ml （A2250A） 1 ml 200 μl
5ml （A2250B） 1 ml×5 200 μl
儲存：
請避光置于-20℃以下可保存３年。該試劑經 30 次凍融后性能無下降，因此不使用時請置于-20℃避光保存。
操作方法
1. 根據機型選擇步驟 A 或 B
A: 需要添加 ROX 染料進行反應孔間信號矯正的 Real-TimePCR 儀，包括：ABI PRISM7900HT, 7300/7500/7500 FastReal-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P(Stratagene)等。按照如下組分配制 20 μl PCR 反應體系：終濃度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意：引物用量有時可提高到 0.8 μl 以提高擴增效率。B:無需添加 ROX 染料進行反應孔間信號矯正的 Real-TimePCR 儀，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)； CFX96Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene等。按照如下組分配制 20 μl PCR 反應體系：終濃度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 進行 Real-Time PCR 反應,通常采用兩步法，程序如下：
 Stage 1: 95℃ 5min*
 Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 20s 40 cycles
 Stage 3: Dissociation analysis
注意：由于該酶為化學修飾的熱啟動 RAPA3G DNA 聚合酶，必須于 95℃加熱 5min 才能恢復酶的活性，該熱啟動步驟不能縮短時間。
3. 反應結束后確認 Real-Time PCR 的擴增曲線、融解曲線和標準曲線。

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