elisa檢測試劑盒平端連接要求的條件:
1、低濃度(0.5mmol/L)的ATP(Ferretti和Sgaranekka,1981)。
2、不存在亞精胺一類的多胺。
3、*濃度的連接酶(50Weiss單位.ml)。
4、高濃度的平端。
平端DNA連接缺點:
1、連接效率比粘性末端低:連接效率之所以比較低,原因之一是在連接過程中只有連接酶的作用,缺乏粘性末端那樣突出堿基的互補作用;原因之二是常用的T4DNAligase對于平末端的Km值比粘性末端高1000倍。
2、可能產生雙向插入:由于平端連接的末端沒有特異性,連接的時候不能定向,所以兩種方向的插入都有可能。這個時候就需要有一種有效的鑒定方法。一般分別在載體和目的片段選擇一個酶切位點進行酶切鑒定,當然,具體的鑒定方法要根據具體的實驗而定。
3、可能多拷貝插入:平端連接時,可能目的片段多個插入,并且在多個插入的時候還有可能每個插入子以不同方向連接,導致有時候結果難以解釋。一般目的片段越大,多拷貝插入的可能就越小。
elisa檢測試劑盒平端DNA連接優(yōu)點:
1、沒有連不上的,只有切不開的。平末端連接不牽扯到粘性末端的堿基突出問題,所以,理論上任何兩條DNA序列都能連接在一起,當然需要ligase的酶學作用。這個不同DNA分子之間的連接帶來了極大地便利,因為平末端自然是這樣,而如果遇到5‘或者3’突出的粘性末端,也可以經過處理成為平末端。
2、有時候,兩個平末端連接在一起以后,可以產生另一種內切酶的識別序列,為后續(xù)的克隆工作提供了一種機會。
2-羥基咔唑 號: 86-79-3
硫氫化鈉,水合 號: 207683-19-0
6-嗎啉煙酰氯 號: 313350-36-6
4-(三氟甲基)芐胺 號: 3300-51-4
2,4,6-三氟吡啶 號: 3512-17-2
5-溴戊酰氯 號: 4509-90-4
1-(3-氨基丙基)咪唑 號: 5036-48-6
2-溴丙酰氯 號: 7148-74-5
N-(3'-丙胺基)-2-吡咯烷酮 號: 7663-77-6
Α,4-二溴苯乙酸乙酯,98% 號: 77143-76-1
4-(三氟甲氧基)苯磺酰氯 號: 94108-56-2
2-(三氟甲氧基)苯磺酰氯 號: 103008-51-1
4-苯氧基芐胺 號: 107622-80-0
雙(2-甲氧乙基)胺 號: 111-95-5
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