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PCR產物中去引物二聚體技術

時間:2020/1/3閱讀:597
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PCR產物中引物二聚體的方法,包括:1)采用超濾離心法對PCR產物進行純化;2)使用磁珠法對1)中獲得的產物進行純化,以進一步去引物二聚體;其中,所述PCR產物和引物二聚體的大小差值為20bp~170bp。
目前,在高通量測序的文庫構建時通常采取磁珠法(例如,CN107236726A和CN106701737A),其原理為:加入不同體積比例的磁珠試劑會吸附不同片段大小的DNA,當加入磁珠體積越少時,吸附的大片段越多。因此,當PCR產物片段與引物二聚體大小相差較大(例如180bp)時,磁珠法在去除蛋白質、鹽離子等雜質的同時也能夠去除引物二聚體;而當PCR產物與引物二聚體大小相差不大時,磁珠法雖然仍能夠去除雜質,但卻無法將PCR產物和引物二聚體很好地區分開來,因而純化效果不佳。有鑒于此,在本領域中存在對大小差距不大的PCR產物與引物二聚體進行有效分離的強烈需求。

PCR擴增過程中往往會產生引物二聚體,而這些引物二聚體導致非特異性擴增,且會參與到文庫構建以及后續的測序中。在測序時,過多的引物二聚體會占用測序通量,從而增加測序成本,因此在PCR擴增后去除引物二聚體是非常必要的。目前去除引物二聚體的方法主要采用的是磁珠法、割膠回收等方法。
 

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