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進口elisa試劑盒檢測原理的方法

時間:2020/11/25閱讀:226
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進口elisa試劑盒檢測原理:

進口elisa試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人組胺(HIS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人組胺(HIS)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

進口elisa試劑盒注意事項:

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應進口elisa試劑盒不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

進口elisa試劑盒操作步驟:

  從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

 設置標準品孔進口elisa試劑盒和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷:

 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

 

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