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樣品的采集和保存:
以RNA提取為目的的樣品,在采樣時就要根據RNA提取的實驗設計進行分裝,在RNAlater中保存 (推薦QIAGEN生產的),4℃運輸并過夜,以保證RNAlater充分與樣品細胞結合,從而完成RNA的固定,之后轉入-20℃保存,如需長期保存 (幾個月以上),應當在-80℃下保存。
提取過程中的注意事項:
1. 所有實驗所用的槍頭、離心管等消耗品均要使用RNase-free的;
2.整個過程要在無RNase污染的條件下進行,通常可以在無菌操作臺中進行實驗,并用75%的酒精進行擦拭殺菌,如有必要也可在實驗前噴灑一些商用的RNase抑制劑;
3.所有相關溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水 (包括75%酒精也需要用無水乙醇與DEPC水配制);
4.溶液的配制使用移液器進行操作,切勿使用量筒等中間器皿;
研5.缽、研棒、鑷子、剪刀等用錫箔紙包好后,200℃干熱滅菌4h;
6. 實驗過程中一定要戴手套和口罩;
7.異丙醇、、乙醇等試劑要使用未開封的,或者開封之后直接分裝至小容量離心管的,以避免多次使用的交叉污染;
注1:現在一般實驗室都使用從公司直接購買的RNase-free水,這種水通常都是大包裝,比如100mL一瓶,在第一次使用的時候,開蓋后一定要將其分裝到1.5或2mL RNase-free離心管中,在冰箱中保存,每次實驗用多少取多少,避免多次實驗的交叉污染。
注2:一定要戴口罩!!!不要怕麻煩,因為你真沒法保證實驗過程中不打噴嚏!!!
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