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NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)紫外分光光度法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-08-15 14:21:40瀏覽次數:95次

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貨號 BJ-016114-2
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)紫外分光光度法公司正在出售的產品:磷化荷爾蒙敏感脂肪抗體Wnt3a/FITC 熒光素標記信號通路Wnt3a抗體IgG
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特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產品名稱

檢測方法

規格

貨號

NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒紫外分光光度法

紫外分光光度法

50管/48樣

BJ-016114-2

商品介紹:

測定意義:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,線粒體中MDH是TCA循環的關鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。

測定原理:

MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。

優點如下:

1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。

2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。

3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。

4、穩定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。

5、再現性好:變異系數CV=1.7%。

6、回收試驗: X =103.3%。

7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復性強。

8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養細胞、細菌、植物組織、各種水產以及化妝品、保健品等,效果均佳。

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測定步驟:

1、 酶標儀預熱30min以上,調節波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。

5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測定各管吸光值A。

注意事項:

待測樣品-70℃可保存1個月。需注意反復凍融會導致SOD部分失活。

一個試劑盒如果不能在3次內使用完畢,其中的WST-8需要在使用時適當分裝,以避免反復凍融導致的檢測效果下降。

標準品稀釋時所用的稀釋液應盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時,標準品也宜使用SOD樣品制備液進行稀釋;當樣品為血液等無需處理的樣品時,宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標準品。

抗氧化物會對本試劑盒的檢測產生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。此時盡管樣品沒有顏色,如果設置了使用說明中的空白對照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。

硫氧還蛋白5抗體北方蜜環菌IBRS-2(豬腎)

擴張型心肌病蛋白1G抗體冷溫木拉克酵母HEC-1-A(人內膜腺癌)

TGFB1誘導抗凋亡因子1抗體乳狀原孢酵母EL4(小鼠淋巴瘤)

端粒酶調節相關蛋白抗體畢赤酵母屬HEC-1-B(人內膜腺癌)

腫瘤相關蛋白抗原L6抗體點柄粘蓋牛肝菌(都不提供)H9c2(2-1) (大鼠心肌)

轉錄增強因子TEF4抗體殺鮭氣單胞菌日本鮭亞種OK(負鼠腎小管)

缺氧誘導蛋白HIG1抗體塔賓曲霉HK-2(人腎小管上皮)

Thimet內肽酶抗體黑曲霉H4(人腦神經膠質瘤)

腫瘤壞死因子誘導蛋白3相互作用蛋白1抗體葡萄汁有孢漢遜酵母PC-3(人前列腺癌)

四連接素TN抗體乳酸鏈球菌P388D1(小鼠淋巴樣瘤)

Toll樣受體1抗體熱帶假絲酵母MSTO-211H(人肺癌)

DNA拓普西異構酶ⅡA抗體厚垣鐮孢菌HL-60(人早幼粒急性白血病)

三葉肽因子2抗體鼠李糖乳桿菌FRhK-4(恒河猴胚腎)

端粒結合蛋白2抗體枯草芽孢桿菌DU 145(人前列腺癌)

形成相關凋亡蛋白7抗體米曲霉NRK-52E(大鼠腎小管導管上皮)
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)紫外分光光度法生長因子受體結合蛋白10(Grb10)試劑盒Anti-CHRNA3 Antibody蛋白磷酸酶2C

不均一核糖核蛋白U (HNRPU)試劑盒Anti-CHRNA3 Antibody染色質組裝因子1P55

骨成型蛋白受體II(BMPR2)試劑盒 Anti-CHRNA4 AntibodyRNA聚合酶1和轉錄釋放因子

原鈣黏素β2(PCDHβ2)試劑盒 Anti-CHRNA5 Antibody磷脂酰脫羧酶PISD

載脂蛋白C2(ApoC2)試劑盒 Anti-CHUK Antibody含patatin樣磷脂酶1

神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒Anti-CIB1 Antibody早幼粒白血病蛋白

粘蛋白4(MUC4)試劑盒Anti-CIC Antibody酪酪肽   

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后


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