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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 磷酸化水通道蛋白2抗體 |
英文名稱 | phospho-AQP2(Ser264) |
貨號 | BJ-K6577 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
Phospho-PPAR Gamma (ser112) 磷酸化過氧化酶活化增生受體γ可可堿五聚乙二單癸Human IL-35 (Ierleukin 35) 檢測試劑盒
PPIG 親環蛋白(親環素)PPIGD-松DL-氨酰-DL-正纈氨酸Human TK1 (Thymidine Kinase 1, Soluble) 檢測試劑盒
Phospho-PPIG (Ser376) 磷酸化親環蛋白(親環素)PPIG常春藤皂苷元DL-氨酰-DL-正纈氨酸Human 12-LO (Arachidonate 12-Lipoxygenase) 檢測試劑盒
PKB/Akt1 蛋白激酶B花椒素雙甘肽 鹽酸鹽Human VIL1 (Villin 1) 檢測試劑盒
phospho-AKT/PKB (Ser473) 磷酸化蛋白激酶B白花前胡雙甘肽 鹽酸鹽Human PI3/Elafin (Peptidase Inhibitor 3, Skin Derived) 檢測試劑盒
phospho-Akt(Thr308) 磷酸化蛋白激酶B佛手柑內酯3-氨基-L-酪氨酸Human TTPα (Alpha Tocopherol Transfer Protein) 檢測試劑盒
phospho-Akt (Thr450) 磷酸化蛋白激酶B左旋肉堿6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉 鹽酸鹽Human FNDC5 (Fibronectin Type III Domain Coaining Protein 5) 檢測試劑盒
Phospho-HDAC4(Ser246)/HDAC5(Ser259)/HDAC7(Ser155) 磷酸化組蛋白去乙酰化酶4、5、7矢車菊素-3-O-葡萄糖苷6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉 鹽酸鹽Human IL-21 (Ierleukin 21) 檢測試劑盒
G蛋白偶聯受體18Monkey RAG-2 (Recombination Activating Gene 2) 檢測試劑盒
G蛋白偶聯受體119Monkey Thyronine 檢測試劑盒
G蛋白偶聯受體88Monkey PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) 檢測試劑盒
G蛋白偶聯受體125Monkey OTF2A (Octamer Transcription Factor 2A) 檢測試劑盒
谷氨酸受體紅藻氨酸離子2/谷氨酸受體6Monkey TIMP-2 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) 檢測試劑盒
谷氨酸受體紅藻氨酸離子3/谷氨酸受體7Monkey EXT1 (Exostoses 1) 檢測試劑盒
谷氨酸受體紅藻氨酸離子2/3Monkey ANKRD1 (Ankyrin Repeat Domain 1) 檢測試劑盒
離子型谷氨酸受體4Monkey ApoM (Apolipoprotein M) 檢測試劑盒
磷酸化水通道蛋白2抗體棘孢小單孢種屬: Micromonospora│echinospora提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no產生Geamcin B慶大霉素B培養基: CM0394生長條件: 35C真空冷凍干燥
Streptomyces│griseolus分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no產生代謝產物具有抑活性培養基: 0012生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;礦物油法;定期移植法
Lactarius│piperatus (L.) Pers.分離基物: 體提供形式: 斜面培養物模式株: no培養基: 14生長條件: 25定期移植法
Alphaherpesvirinae│Duck plague virus分離基物: 病雞結痂提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no研究培養基: 0生長條件: 37真空冷凍干燥法;
Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no抗細培養基: CM0027生長條件: 28C-80℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
Streptomyces│canus提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no培養基: 0027生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;礦物油法;定期移植法
Saccharomyces│cerevisiae分離基物: 曲藥提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no釀酒培養基: 0013生長條件: 25-28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Bacillus│subtilis提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no檢測。培養基: CM0002生長條件: 37℃礦物油法
Vibrio│parahaemolyticus提供形式: 凍干物;凍結物模式株: no培養基: 820生長條件: 22℃-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
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