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細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復蘇細胞步驟: 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
公司產品僅用于科研
產品名稱:鴨胚胎成纖維細胞
產品英文代號:Duck embryo
細胞培養條件:D/F12+10%FBS+1%p/s+0.005mg/ml胰島素+5ng/mlBfGF+1ug/ml氫化+50ug/ml抗壞血酸(維C)+7.5mM L-Gln (推薦:PriMed-西格-003)
生長狀態:貼壁生長
產品規格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養溫度(℃):37
運輸溫度(℃):常溫
運費基數:活細胞包郵/凍存100-400元干冰費
穩定貨期(是or否): 是
產品名稱 | |
規格 | 1×106 |
貨號 | BJX6718 |
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細胞培養及傳代:
<1>細胞培養
產品僅用于科研細胞請于細胞培養箱中培養,大部分細胞是37℃,5% CO2,濕度環境下培養的。有極少部分細胞培養條件不行,請仔細閱讀相應的細胞說明書,使用正確的培養基及培養條件;
細胞于培養瓶或皿中培養,加入適量說明書上標注的細胞相應*培養基(一般液面高度2-3mm即可)。
<2>細胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)
細胞培養至密度達80%以上時即可傳代,先將細胞培養基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養基全部吸干舍棄;
培養皿加入2-3mL無菌PBS,輕輕晃動皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
加入1mL胰酶,輕輕晃動皿,使胰酶浸沒到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養箱中消化;
3min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞不再貼壁,即可加入*步收集的培養基混勻;
若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至不貼壁為止;
將細胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養皿中,補加新培養基后放回培養箱培養。
<3>相關問題
部分細胞在傳代后時,會有以下現象:細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養基漂浮一些死細胞或者細胞長的極慢。出現以上現象時,可以咨詢本公司技術人員此現象是否正常及相關處理方式,不要頻繁換液,大多數細胞1周換液2-3次即可。
細胞碎片較多、背景較臟時,貼壁細胞用PBS漂洗兩次、懸浮細胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3,長得比較快的細胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養所使用的培養基,會有大量細胞碎片甚至導致細胞死亡的風險。
細胞狀態不好或者生長極慢的時候,可以通過增加血清濃度調整細胞狀態及生長速度。
請不要隨意更換培養基,因實驗需要,可以逐步馴化。
懸浮傳代:混勻細胞,收集細胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,再離心后,用*培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。 ?
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
產品僅用于科研在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領域較為寬廣,如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線。
著絲粒蛋白32(CENP32)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 100g
癌/抗原62(CTAG62)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 燕麥鐮孢 25g
Sugen激酶071(SGK071)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 5g
Ashwin蛋白(Ash)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 厚環乳牛肝菌 100g
蛋白C10(C10)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 拜耳接合酵母 25g
B-黑色素瘤抗原5(BAGE5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 米根霉 5g
著絲粒蛋白36(CENP36)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 多育曲霉 1g
可溶性半乳糖苷結合凝集素16(LGALS16)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 流產布魯氏菌 生物Ⅰ型 5g
內切核酸酶V(ENDOV)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 香菇 1g
Kazrin蛋白(KAZN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 假單胞菌 1g
前庭蛋白1(VEST1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 約氏乳桿菌 25g
殺傷蛋白(KLLN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 產單核細胞李氏桿菌 5g
胰蛋白酶X3(TRYX3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 平菇 1g
Whirlin蛋白(WHRN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 灰葡萄孢 1g
皮卡丘素(Pikachurin)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥98% 拉曼傘狀霉 10MG
血色病蛋白(HFE)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 1g
微腦磷脂1(MCPH1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 中國葡萄座腔菌 5g
型胱胺酸癥蛋白(CTNS)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 茶擬莖點霉 1g
鴨胚胎成纖維細胞價格人子宮癌組織源Human Cancer: Uterine CancerTissues CellsDerivatives人子宮癌組織源細胞提取物是從人原代子宮癌組織源細胞提取的,人原代子宮癌組織源細胞從人子宮癌組織制備。子宮癌組織采集自各地方醫院,采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)ELISA試劑盒Androgen Receptor Antibody100 ul
人抗中性粒細胞抗體(ANA)ELISA試劑盒 CDK9 (C12F7) Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul
人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb20 ul
人抗髓鞘相關糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA試劑盒 Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb100 ul
人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(MCV)ELISA試劑盒 Pyruvate Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAb20 ul
人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)ELISA試劑盒 Pyruvate Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAb100 ul
人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒 GPX1 Antibody100 ul
人抗單核細胞抗體(AMA)ELISA試劑盒AMACR (2A10) Mouse mAb100 ul
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