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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端) |
英文名稱 | APAF1(CT) |
貨號 | BJ-K6705 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
Phospho-Syk (Tyr323) 磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-71,3-二(4-氨氧基)Mouse FXII (Coagulation Factor XII) 檢測試劑盒
Phospho-Syk (Tyr525/526) 磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶內收蛋白三Mouse F13B (Coagulation Factor XIII B Polypeptide) 檢測試劑盒
SYVN1 滑膜細胞凋亡抑制物1脂肪組織分化相關蛋白三Mouse CFL1 (Cofilin 1, Non-Muscle) 檢測試劑盒
alpha-Synuclein() 核突觸蛋白-α(N端)脂聯素受體1Boc-Orn(Z)-OHMouse CFL2 (Cofilin 2, Muscle) 檢測試劑盒
Alpha-Synuclein 核突觸蛋白-α腎上腺髓質素受體Boc-Orn(Z)-OHMouse COL2 (Collagen Type II) 檢測試劑盒
Alpha-Synuclein 核突觸蛋白脂聯素原酸*酯Mouse COL3 (Collagen Type III) 檢測試劑盒
gamma Synuclein 核突觸蛋白-γ腎上腺髓質素原酸*酯Mouse COL4 (Collagen Type IV) 檢測試劑盒
Syaxin 1 突觸融合蛋白1腺苷受體A3LaquinimodMouse COL1α2 (Collagen Type I Alpha 2) 檢測試劑盒
葡萄糖6磷酸酶α/G6Pase-αMonkey BCAR1 (Breast Cancer Ai Estrogen Resistance 1) 檢測試劑盒
糖磷脂酰肌Monkey CFI (Compleme Factor I) 檢測試劑盒
乙二酶1Monkey NNE (Non-Neuronal Enolase) 檢測試劑盒
核呼吸因子2Monkey AIRA (Ai-Insulin Receptor Aibody) 檢測試劑盒
腫瘤轉移抑制基因GDIA1Monkey PDPN (Podoplanin) 檢測試劑盒
腫瘤轉移抑制基因GDIA2Monkey VacA (Vacuolating Cytotoxin A) 檢測試劑盒
胰高血糖素Monkey FUCA (Alpha-L-Fucosidase, Tissue) 檢測試劑盒
線粒體甘油3磷酸?;D移酶Monkey PYY (Peptide YY) 檢測試劑盒
凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端)Penicillium│sp.提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no抗癌活性培養基: CM0014生長條件: 28C真空冷凍干燥
Agrobacterium│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no能夠在含2000ppm氯嘧磺隆的無機鹽加2%葡萄糖平板生長。培養基: 0033生長條件: 30℃-80℃冰箱凍結法;定期移植法
Trichoderma│longbrachiatum提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no培養基: 0014生長條件: 30℃
蔬菜芽孢桿種屬: Bacillus│oleronius提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yes模式株培養基: 0002生長條件: 30℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Shigella│flexneri分離基物: 食物,水提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no分類學研究培養基: 2生長條件: 37℃真空冷凍干燥法
Aspergillus│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no活性物質;退行性疾病培養基: CM0014生長條件: 28C-80℃冰箱凍結
Vibrio│sp.分離基物: 生物樣/日本對蝦提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no致病微生物/日本對蝦弧病致病培養基: 471生長條件: 36℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Beauveria│bassiana提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養基: 0014生長條件: 25-28℃-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Leptospirillum│ferrooxidans分離基物: 礦山酸性水中提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no生物浸礦培養基: 718生長條件: 30℃真空冷凍干燥法
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