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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 著絲粒蛋白T抗體 |
英文名稱 | CENPT |
貨號 | BJ-K8233 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
Phospho-5-Lipoxygenase (Ser663) 磷酸化5-脂氧合酶酸棗仁皂甙D2-氯TBX2/T-box2(T-box Protein 2) 新型抑癌基因(多肽)
8-OHdG 8-羥基脫氧鳥苷白樺脂酸甲磺酸雷沙吉蘭TCF7L2(transcription factor 7-like 2) 轉錄因子7類似物2抗原
A2AR 腺苷A2A受體升麻素苷甲磺酸雷沙吉蘭TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein) Tar DNA 結合蛋白43抗原
AACT-Alpha1 α-1抗胰糜蛋白酶升麻素2-吡啶鹽酸鹽Tenascin 固生蛋白抗原
AAK1 AP2關聯激酶1類葉升麻苷(麥角甾苷)2-吡啶鹽酸鹽TEM 1/CD248(Tumor endothelial marker 1 precursor) 內涎蛋白/內皮唾液酸蛋白抗原
AARS2 氨酰tRNA合成酶2異類葉升麻苷(異麥角甾苷)異硫酰甲酸乙酯TFF3 (trefoil factor3) 三葉肽因子3(多肽)
AAT α-1抗胰蛋白酶松果菊苷異硫酰甲酸乙酯TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2) 組織因子途徑抑制劑-2抗原
AATK AATK細胞凋亡關聯酪氨酸激酶5-O-甲基維斯阿米苷4-(甲硫基)TIEG1/KLF10(TGF-beta inducible early response gene 1) TGF-β誘導早期應答基因1抗原
細胞角蛋白42Glutathionesulfonic acidPorcine FE (Ferritin) 檢測試劑盒
CD1054-溴巴豆酸乙酯Porcine snRNP/Sm (Small Nuclear Ribonucleoprotein) 檢測試劑盒
半胱胺酸蛋白酶蛋白-74-溴巴豆酸乙酯Porcine CNX (Calnexin) 檢測試劑盒
CD8/CD8-β4-溴巴豆酸乙酯Porcine ARRβ1 (Arrestin Beta 1) 檢測試劑盒
細胞周期蛋白依賴性激酶CABLES2二氯烯胺Porcine GAL4 (Galectin 4) 檢測試劑盒
兔抗雞IgY二氯烯胺Porcine AVPR1A (Arginine Vasopressin Receptor 1A) 檢測試劑盒
20號染色體開放閱讀框1282-氯-6-氟基Porcine Bid (BH3 Ieracting Domain Death Agonist) 檢測試劑盒
細胞色素P450ⅡE12-氯-6-氟基Porcine C3c (Compleme Fragme 3c) 檢測試劑盒
著絲粒蛋白T抗體香菇Rat GAL3 (Galectin 3) Kit
金龜子綠僵Rat GAL4 (Galectin 4) Kit
硫化物氧化假諾卡氏Rat GAL7 (Galectin 7) Kit
金黃色葡萄球Rat GAL8 (Galectin 8) Kit
擬莖點霉Rat GAL9 (Galectin 9) Kit
墨汁鬼傘Rat γGT1 (Gamma Glutamyltransferase 1) Kit
高加索鏈霉Rat GJb1(Gap Junction Protein Beta 1) Kit
微膠鐮孢Rat GIP (Gastric Inhibitory Polypeptide) Kit
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