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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 肥大細胞膜抑制性受體Allergin1抗體 |
英文名稱 | Allergin-1 |
貨號 | BJ-K6737 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
TRPM2 瞬時受體電位離子通道蛋白(M亞家族)錨蛋白重復域28二乙氧基二基硅烷Mouse FGF9 (Fibroblast Growth Factor 9) 檢測試劑盒
c/Troponin T 心肌特異性肌鈣蛋白T淋巴細胞相關AF4樣蛋白1-(3-氨基)-2-甲基哌啶Mouse FGFBP1 (Fibroblast Growth Factor Binding Protein 1) 檢測試劑盒
TSARG3 生精細胞凋亡相關基因3錨蛋白重復結構域蛋白121-(3-氨基)-2-甲基哌啶Mouse FRS2 (Fibroblast Growth Factor Receptor Substrate 2) 檢測試劑盒
TSARG4 生精細胞凋亡相關基因4錨蛋白重復結構域蛋白13AN,O-雙(*基硅烷基)ouse FRS3 (Fibroblast Growth Factor Receptor SubstRate 3) 檢測試劑盒
TSARG6/DNAJB13 生精細胞凋亡相關基因6錨蛋白重復結構域蛋白9N,O-雙(*基硅烷基)三ouse FMOD (Fibromodulin) 檢測試劑盒
TSARG7 發生相關的新基因錨蛋白重復及SAM結構域蛋白1AN,O-雙(*基硅烷基)三Mouse FLRT2 (Fibronectin Leucine Rich Transmembrane Protein 2) 檢測試劑盒
CIDEB CIDEB脂肪特定轉錄因子2聚(1,4-丁二丁二酸)酯Mouse FN (Fibronectin) 檢測試劑盒
Tsg101 tsg101載脂蛋白L35-氟-2-胺Mouse FLNa (Filamin A) 檢測試劑盒
GTP環反饋調節蛋白Monkey PICP (Procollagen I C-terminal Propeptide) 檢測試劑盒
絨毛膜特異性轉錄因子GCM2Monkey VIP (Vasoactive Iestinal Peptide) 檢測試劑盒
廣泛控制氨基酸合成1樣蛋白1Monkey C4BPα (C4 Binding Protein Alpha) 檢測試劑盒
β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖轉移酶2Monkey CETP (Cholesteryl Ester Transfer Protein) 檢測試劑盒
磷酸化G蛋白激活內向通道1Monkey CYPB (Cyclophilin B) 檢測試劑盒
G蛋白偶聯受體激酶相互作用蛋白2Monkey IL-12 p40 (Ierleukin 12 p40) 檢測試劑盒
間隙連接蛋白10Monkey ApoA2 (Apolipoprotein A2) 檢測試劑盒
間隙連結蛋白46/白內障相關蛋白Monkey IFN-β (Ierferon Beta) 檢測試劑盒
肥大細胞膜抑制性受體Allergin1抗體Lactobacillus│plaarum分離基物: 發霉紅薯提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養基: 6生長條件: 37℃-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他
Bacillus│subtilis subsp. subtilis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no蛋白酶(770U/ml)培養基: 0002生長條件: 30℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
黃直絲鏈霉種屬: Streptomyces│flavorectus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yes模式株。對產朊圓酵母和稻瘟絲有溶作用。培養基: 0012生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm.分離基物: 組織塊提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no食用培養基: 14生長條件: 25-30定期移植法
蘇云金芽孢桿種屬: Bacillus│thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養基: 0002生長條件: 28-32℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
奇異變形桿種屬: Proteus│mirabilis提供形式: 其他安全等級: 2模式株: no培養基: CM0051生長條件: 37℃真空冷凍干燥法
鏈霉種屬: Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養基: 0012生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Isaria│cicadae Miq.分離基物: 子實體提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no培養基: 17生長條件: 28定期移植法
Trametes│sp.分離基物: 闊腐提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no培養基: 0017生長條件: 25℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
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