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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 銜接蛋白γ/γ-Adaptin抗體 |
英文名稱 | Gamma-Adaptin |
貨號 | BJ-K6726 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
FSF4 腫瘤壞死因子配體超家族成員4磷酸化蛋白激酶B(全氟己基)乙烯Mouse DKK3 (Dickkopf Related Protein 3) 檢測試劑盒
OX40/CD134/FRSF4 CD134磷酸化水通道蛋白2CHIR-99021Mouse NE (Neutrophil Elastase ) 檢測試劑盒
F-beta 腫瘤壞死因子-β磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白三氟磺酸鐿水合物Mouse ELA4 (Elastase 4) 檢測試劑盒
FAIP1 腫瘤壞死因子α誘導蛋白1磷酸化蛋白激酶B三氟磺酸鐿水合物Mouse ELN (Elastin) 檢測試劑盒
FSF14 腫瘤壞死因子配體超家族成員14磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白三氟磺酸鐿水合物Mouse EMILIN1 (Elastin Microfibril Ierface Located Protein 1) 檢測試劑盒
FAIP3 腫瘤壞死因子α誘導蛋白3磷酸化活化轉錄因子43-乙酰-2,5-二甲基噻吩Mouse ELOA (Elongin A) 檢測試劑盒
Acetylated-p53 (Lys382) 乙酰化P53(Lys382)磷酸化雄激素受體3-乙酰-2,5-二甲基噻吩Mouse EED (Embryonic Ectoderm Developme) 檢測試劑盒
FSF18 腫瘤壞死因子配體超家族成員18磷酸化雄激素受體四丁酚Mouse EMAb (Endometrium Aibody) 檢測試劑盒
鳥苷酸環(huán)化酶α2/GCS-α-2Monkey CK-13/KRT13 (Cytokeratin 13) 檢測試劑盒
G蛋白偶聯(lián)受體7Monkey PKCη (Protein Kinase C Eta ) 檢測試劑盒
糖基磷脂酰肌錨連接蛋白1Monkey βAPP (β Amyloid Precursor Protein) 檢測試劑盒
3-磷酸甘油酰基轉移酶2Monkey fMet (Formylmethionine) 檢測試劑盒
G蛋白修補結構域蛋白4Monkey ET-1 (Endothelin 1) 檢測試劑盒
富含GC啟動子結合蛋白1/血管壁相連蛋白Monkey GEF (Guanylate Exchange Factor) 檢測試劑盒
血管壁相連蛋白樣蛋白1Monkey F7 (Coagulation Factor Ⅶ) 檢測試劑盒
G蛋白偶聯(lián)受體151Monkey ADH1 (Alcohol Dehydrogenase 1) 檢測試劑盒
銜接蛋白γ/γ-Adaptin抗體Cunninghamella│echinulata var. echinulata提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Shigella│boydii提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no致病芯片研發(fā)培養(yǎng)基: 51生長條件: 37℃-80℃冰箱凍結法
Aeromonas│sobria分離基物: 羅非魚提供形式: 斜面培養(yǎng)物;凍干物安全等級: 3模式株: no魚病研究培養(yǎng)基: 2生長條件: 28℃真空冷凍干燥法
巴氏葡萄球種屬: Staphylococcuspasteuri安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃
Bacillus│thuringiensis分離基物: 1-5cm土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃-80℃冰箱凍結法
黑曲霉種屬: Aspergillus│niger提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: noused for aimicrobial preservative test培養(yǎng)基: 0015生長條件: 25-28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Escherichia│coli分離基物: 病料提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no用于科研培養(yǎng)基: 335生長條件: 37真空冷凍干燥法;
Streptococcus│equi subsp.zooepidemicus分離基物: 病料提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no研究培養(yǎng)基: 396生長條件: 37真空冷凍干燥法;
米黑根毛霉種屬: Rhizomucormiehei安全等級: 1模式株: no產(chǎn)凝乳酶培養(yǎng)基: 17生長條件: 37℃
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