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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 腺相關病毒5 VP1抗體 |
英文名稱 | AAV5 capsid protein VP1 |
貨號 | BJ-K6860 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
ADRB2/FITC 熒光素標記腎上腺素能受體β2IgG小腸鈉通道蛋白5異硫酸熒光素Mouse ATPase (ATPase, Na+/K+ Transporting) 檢測試劑盒
ADRB2(phospho Ser346)/FITC 熒光素標記磷酸化腎上腺素能受體β2IgGAPXL蛋白異硫酸熒光素Mouse NN-T4 (Neonatal Thyroxine) 檢測試劑盒
ADRB2/RBITC 羅丹明標記腎上腺素能受體β2IgG酸敏感離子通道蛋白3異喹啉-3-羧酸甲酯Mouse NGF (Nerve growth factor) 檢測試劑盒
ADRB3/ Beta3-AR /RBITC 羅丹明標記腎上腺素能受體β3IgG天門冬氨酸β羥化酶異喹啉-3-羧酸甲酯Mouse NCAM/CD56 (Neural Cell Adhesion Molecule) 檢測試劑盒
ADRB3/ Beta3-AR /FITC 熒光素標記腎上腺素能受體β3IgG精氨酸加壓素受體2羥基(甲磺酰氧代)Mouse NF (Neurofilame Protein) 檢測試劑盒
CD8/RBITC 羅丹明標記CD8IgG細胞骨架肌動蛋白樣蛋白3羥基(甲磺酰氧代)Mouse NGB (Neuroglobin) 檢測試劑盒
AD7C/FITC 熒光素標記神經絲蛋白IgG膜粘連蛋白83,5-雙(三氟甲基)甲Mouse Slit2 (Slit Homolog 2) 檢測試劑盒
AD7C-P/P/AF /FITC 熒光素標記神經絲蛋白(人)Ig通道蛋白83,5-雙(三氟甲基)甲Mouse NPY (Neuropeptide Y) 檢測試劑盒
CD69/CLEC2C/AIM/FITC 熒光素標記活化誘導分子CD69IgGBcl2相關抗凋亡基因63-*硅烷基炔Mouse EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) 檢測試劑盒
CD73/FITC 熒光素標記胞漿-5´-核苷酸酶-ⅡIgG半乳糖轉移酶7亞基β1,43-*硅烷基炔Mouse EG-VEGF (Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor)檢測試劑盒
CD79A/IGBP-1 /FITC 熒光素標記免疫球蛋白結合蛋白-1IgGBEN結構域蛋白53-*硅烷基炔Mouse IL-1R2 (Ierleukin 1 Receptor Type II) 檢測試劑盒
B7-1/CD80 /FITC 熒光素標記抗刺激分子B7-1蛋白IgG巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS5TeniposideMouse FSF14 (Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily, Member 14)檢測試劑盒
CD80/B7-1/FITC 熒光素標記刺激分子B7-1蛋白IgG癌相關蛋白1Ethynodiol diacetateMouse MCSF (Macrophage Colony Stimulating Factor 1) 檢測試劑盒
CD82/KAI1/FITC 熒光素標記腫瘤轉移抑制蛋白1IgG腦蛋白CG6Ethynodiol diacetateMouse IL-22 (Ierleukin 22) 檢測試劑盒
CD83/Cell surface protein HB15/FITC 熒光素標記CD83IgG晶狀體蛋白2Ethynodiol diacetateMouse ApoA1 (Apolipoprotein A1) 檢測試劑盒
CD84/SLAMF5/FITC 熒光素標記CD84IgG7號染色體開放閱讀框27正辛基 α-D-葡萄糖苷Mouse PL (Pancreatic Lipase) 檢測試劑盒
腺相關病毒5 VP1抗體多粘類芽孢桿種屬: Paenibacillus│polymyxa提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養基: 0002生長條件: 30℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Bacillus│cereus分離基物: 膽南星提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no飼料添加劑培養基: 33生長條件: 37℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Candida│parapsilosis分離基物: 沉積樣/老鼠勒根泥提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no近海酵母培養基: 513生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法
Auricularia│auricula分離基物: 朽木提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no用于生產食用培養基: 14生長條件: 25℃真空冷凍干燥法
Sporobolomyces│roseus分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no用于真擲孢現象教學培養基: 13生長條件: 28℃真空冷凍干燥法
凝結芽孢桿種屬: Bacillus│coagulans分離基物: 乳制品提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yes產糖苷水解酶抑制物、產L(+)乳酸培養基: 348生長條件: 37℃真空冷凍干燥法
模式株: 未知
Tricholoma│inocybeoides A. Pearson分離基物: 蓋或柄提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no培養基: 14生長條件: 26定期移植法
Penicillium│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no抗真培養基: CM0014生長條件: 26C液氮超低溫凍結
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