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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 血管緊張素Ⅱ受體2抗體 |
英文名稱 | AT2R2 |
貨號 | BJ-K6832 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區別,就在于抗體能與相應抗原發生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
Rat IgA/FITC 熒光素標記兔抗大鼠IgA腺相關病5 VP14-甲基-2-甲Mouse Lp-a (Lipoprotein a) 檢測試劑盒
ABI1/SSH3BP1/FITC 熒光素標記ABI1/SSH3BP1蛋白IgG脂肪脫氫酶4-甲基-2-甲Mouse Lp-PL-A2 (Lipoprotein-associated Phospholipase A2) 檢測試劑盒
ACD/PTOP/FITC 熒光素標記腎上腺皮質發育異常蛋白IgG抗利尿激素1A4-甲基-2-甲Mouse PAL (L-Phenylalanine ammonla-lyase) 檢測試劑盒
ACE1/FITC 熒光素標記血管緊張素轉換酶IgG抗利尿激素受體1B2-氨基-4-甲Mouse LHRH (Luteinizing Hormone-Releasing Hormone) 檢測試劑盒
ACE2/FITC 熒光素標記血管緊張素轉換酶2IgG二磷酸腺苷核糖基化因子鳥嘌呤核苷酸交換因子22-氨基-4-甲Mouse LFA-3 (lymphocyte function associated aigen 3) 檢測試劑盒
ACEI/FITC 熒光素標記血管緊張素1轉換酶抑制劑IgGα增強子結合蛋白14-芐氧基吡啶-N-氧化物Mouse Lp/XCL1 (Lymphotactin) 檢測試劑盒
Acetyl CoA Carboxylase/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠、猴、牛乙酰輔酶A羧化酶IgG脊髓小腦共濟失調104-芐氧基吡啶-N-氧化物Mouse LZM (Lysozyme) 檢測試劑盒
Phospho-Acetyl CoA Carboxylase(Ser79) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠、猴、牛磷酸化乙酰輔酶A羧化酶IgG蛋白激酶A錨定蛋白7肉桂基氯Mouse BSP (Bone Sialoprotein) 檢測試劑盒
CD31/FITC 熒光素標記血小板內皮細胞黏附分子-1IgG腦轉錄因子4蛋白4-溴-2-甲基噻吩Mouse LDL (Low Density Lipoprotein) 檢測試劑盒
CD31(PECAM-1)/PE 熒光素PE標記血小板內皮細胞黏附分子-1IgG膽鹽激活脂肪酶4-溴-2-甲基噻吩Mouse FASN (Fatty Acid Syhase) 檢測試劑盒
CD31(PECAM-1)/HRP 辣根過氧化物酶標記血小板內皮細胞黏附分子-1IgG3-羥丁酸脫氫酶7-硝基吲唑Mouse HDL (High Density Lipoprotein) 檢測試劑盒
CD31/FITC 熒光素標記血小板內皮細胞黏附分子-1IgG長鏈脂肪酸酰基輔酶A水解酶7-硝基吲唑Mouse c/2 (Troponin T Type 2, Cardiac) 檢測試劑盒
CD33/Siglec-3/FITC 熒光素標記抗CD33IgG磷酸化癌易感基因1代磷酸二乙酯Mouse PYY (Peptide YY) 檢測試劑盒
CD33/FITC 熒光素標記抗CD33IgG磷酸化β分泌酶代磷酸二乙酯Mouse SOD1 (Superoxide Dismutase 1, Soluble) 檢測試劑盒
CD33L/OBBP1/FITC 熒光素標記兔CD33LIgG磷酸化相關死亡促進因子2-氯煙酸Mouse IgG2b (Immunoglobulin G2b) 檢測試劑盒
CD34/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠、兔、牛、豬、犬CD34IgG磷酸化相關死亡促進因子2-氯煙酸Mouse IgG2c (Immunoglobulin G2c) 檢測試劑盒
血管緊張素Ⅱ受體2抗體Eerobacter│cloacae提供形式: 凍干物;凍結物模式株: no培養基: 820生長條件: 22℃-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Marella│mediterranea分離基物: 水樣/深海底層水樣提供形式: 凍干物模式株: no潛在的有機污染物降解/分離自石油富集群培養基: 471生長條件: 25℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Micromonospora│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式株: no抗真;抗白色念珠培養基: CM0038生長條件: 28C-80℃冰箱凍結
Alcanivorax│jadensis分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式株: no有機污染物降解/石油烴類降解培養基: 745生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Cladosporium│herbarum提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養基: 0014生長條件: 25-28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
云南游動放線種屬: Actinoplanes│yunnanensis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yes模式株培養基: 0011生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Escherichia│coli分離基物: 病料提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no科研及血清定型培養基: 335生長條件: 37真空冷凍干燥法;
Streptomyces│sp.分離基物: 表面土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no分類學及微生物藥物學的研究培養基: 12生長條件: 28℃真空冷凍干燥法;其他
Pelagicola│litoralis分離基物: 沉積物/深灰色沉積物提供形式: 凍干物模式株: no極地細培養基: 471生長條件: 15℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
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