客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。

產品名稱：Cy3

規格：5 mg/25 mg/50 mg

貨號：BJP1116

分類：熒光定量PCR試劑盒

產品僅用于科研儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。

運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

染料法

探針法　

可進行相對，定量表達分析，定性分析，SNP檢測等

實驗報告

·電泳圖   ·標準曲線 

·溶解曲線 ·擴增曲線

·完整的實驗過程、試劑、儀器及分析報告

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針法：

aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時，熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切，使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。

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檢測步驟：

一、 試劑的準備

從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。

設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：

試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量

熒光PCR反應液 14µL N×14µL

酶混合物 1 µL N×1 µL

總量 15 µL N×15µL

（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。

7.2 qPCR反應條件

將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。

推薦循環條件:

1循環 50℃ for 2 min

預變性 1循環 95℃ for 10 min

PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

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Cy3Amycolatopsisdecaplanina種屬: Amycolatopsisdecaplanina分離基物: 土壤安全等級: 1模式菌株: no培養基: 158生長條件: 28℃

Marinobacter│sp.分離基物: 水樣/表層海水凍干物模式菌株: no應用領域: 潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養基: 821生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

Coniothyrium│minitans斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 主要用于研究盾殼霉孢子形成的分子機理培養基: 14生長條件: 20℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

運動發酵單胞菌種屬: Zymomonas│mobilis凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 生產酒精。培養基: CM0199生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Bacillus│thuringiensis凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產蛋白酶培養基: CM0002生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Bacillus│thuringiensis分離基物: 玉米螟凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 2生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Arthrobotrys│yunnanensis分離基物: 土壤斜面培養物；凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 18生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法

Bacillus│thuringiensis凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 主要用于分類學研究培養基: 2生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Saccharomyces│cerevisiae凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 釀造酒精、制面包。培養基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法
操作程序：

由您提供該實驗中目的基因的相關資料（如：基因名稱、序列等信息），我們共同探討服務的可能性和技術路線；

商定服務收費、付款方式、服務期限等，并簽定技術服務合同。

有您提供實驗所需的足夠量的實驗樣本（100mg組織或107個細胞），本公司不接受您提供的RNA樣本

PCR所需引物/探針（如果用探針法），可以由您自己提供，也可以委托本公司設計合成（費用另計）。如果由您自己提供，必須是PAGE純化的高質量的干粉，本公司不接受已溶解的引物/探針。

我們進行RNA抽提、RNA定量、反轉錄、Real-time PCR擴增、數據分析。

產品僅用于科研提供實驗報告，包括實驗過程、所用儀器試劑、擴增曲線、標準曲線和相關分析數據等。