當前位置:上海研生實業有限公司>>PCR試劑盒>>PCR鑒定試劑盒>> 50次百部PCR鑒定試劑盒規格 基因擴增儀
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數增長期。
2.標本結果判定:
(1)陽性:標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數增長期。
(2)可疑:標本檢測結果Ct值在35~38范圍內。此時應對標本進行重復檢測,如重復實驗結果Ct值仍在35~38范圍內,有明顯指數增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標本檢測結果Ct值>38或無Ct值。
參數規格:
產品名稱:百部PCR鑒定試劑盒規格
英文名稱:Radix stemonae
貨號:YSP8525
產品規格:50次
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
5-基-2-基吡啶 97% 沙拉沙星木槿提取物Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) ELISA Kit
Human KLK6(Kallikrein-6) ELISA Kit
環氧氯烷 Standard for GC,≥99.6% (GC) 氯草定雞腳參提取物Human SERPINA4(Kallistatin) ELISA Kit
Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit
環氧氯烷 AR 苯并[e]芘兒茶提取物Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit
Human KLK1(Kallikrein-1) ELISA Kit
環氧氯烷 CP 3-氟-4-氰基苯酸酯粉防己提取物Human KLK5(Kallikrein-5) ELISA Kit
Human LN(Laminin) ELISA Kit
環氧氯烷 ≥99.5% (GC) 2,4,5-三基苯胺寄生提取物Human LEP(Leptin) ELISA Kit
Human Leptin R(Leptin receptor) ELISA Kit
環氧氯烷 分析標準品 嘧菌酯黃水茄提取物Human LIFR(Leukemia inhibitory factor receptor) ELISA Kit
Human LUM(Lumican) ELISA Kit
2,6-二基吡啶 98% 霉酚酸嗎啉酯豆瓣菜提取物Human MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA Kit
Human MDC(Macrophage Derived Chemokine) ELISA Kit
3,5-二基吡啶 98% 3,4,5-三氧基苯酸廣玉蘭提取物Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) ELISA Kit
Human C-ERC(Mesothelin) ELISA Kit
酰酸酯 99% 分散藍 35珍珠母提取物Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit
Human MIA(Melanoma Inhibitory Activity Protein 1) ELISA Kit
酰酸酯 CP,98% 酰嘧磺隆紅蘿卜提取物Human MK(Midkine) ELISA Kit
Human MIP-1α(Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit
百部PCR鑒定試劑盒規格aGT(Human angiotensinogen) ELISA Kit 人血管緊張素原射干苷 分析標準品,>98% 呋喃唑酮 98%Fusarium equiseti
aGT ELISA Kit 大鼠血管緊張素原鳶尾黃素 分析標準品,≥98%呋喃西林 分析標準品Fusarium graminearum
AGPA/PCA(Human anti-gastric parietal cell antibody) ELISA Kit 人抗胃壁細胞抗體鳶尾黃素 分析標準品,≥97% 呋喃西林 98%Fusarium moniliforme
Ag-NORs(Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins) ELISA Kit 人核仁形成區嗜銀蛋白辣椒素 分析標準品,>98%硫酸鋁,十八水 Ph. Eur., BP, 100-110%, 51.0-59.0% Al2(SO4)3 Fusarium nivale
a-Glu(Mouse Alpha-Glucosidase) ELISA Kit 小鼠α葡萄糖苷酶溴苯 CP,98.0%硫酸鋁 99.99% metals basisFusarium oxysporum
a-Glu ELISA Kit 大鼠α葡萄糖苷酶溴苯 99.5%赫斯特熒光燃料,33258 98%Fusarium poae
AGEs(Mouse advanced glycation end products) ELISA Kit 小鼠晚期糖基化終末產物溴苯 AR,99%赫斯特熒光燃料,33342 98%Fusarium solani
AGEs ELISA Kit 大鼠晚期糖基化終末產物溴苯 Standard for GC,>99.5%(GC)胞內鈣熒光探針BAPTA, AM 95%Fusarium sporotricoides
AGAA(Human anti-golgi apparatus antibody) ELISA Kit 人抗高爾基體抗體3-溴酸 98%2',7'-二-(2-羧基)-5(6)-羧基熒光素 90%Fusarium spp.
AGA(Human anti-gliadin antibody) ELISA Kit 人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體1,8-二溴辛烷 98%2',7'-二-(2-羧基)-5(6)-羧基熒光素酰酯1 mg/ml,溶劑:DMSOFusarium tricinctum
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論
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