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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級會(huì)員 | 第9年

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ATCC細(xì)胞
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分析細(xì)胞周期同步化

時(shí)間:2017/6/6閱讀:486
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(一)ATCC細(xì)胞自然同步化

1.多核體如粘菌只進(jìn)行核分裂,而不發(fā)生胞質(zhì)分裂,形成多核體。數(shù)量眾多的核處于同一細(xì)胞質(zhì)中,進(jìn)行同步化分裂,使細(xì)胞核達(dá)108,體積達(dá)5~6cm。瘧原蟲也具有類似的情況。 2.某些水生動(dòng)物的受精卵如海膽卵可以同時(shí)授精,Z初的3次細(xì)胞分裂是同步的,再如大量海參卵受精后,前9次細(xì)胞分裂都是同步化進(jìn)行的。 3.增殖抑制解除后的同步分裂如真菌的休眠孢子移入適宜環(huán)境后,它們一起發(fā)芽,同步分裂。

(二)人工同步化

1.選擇同步化

1)有絲分裂選擇法:使單層培養(yǎng)的細(xì)胞處于對數(shù)增殖期,此時(shí)分裂活躍,MI高。有絲分裂細(xì)胞變圓隆起,與培養(yǎng)皿的附著性低,此時(shí)輕輕振蕩,M期細(xì)胞脫離器壁,懸浮于培養(yǎng)液中,收集培養(yǎng)液,再加入新鮮培養(yǎng)液,依法繼續(xù)收集,則可獲得一定數(shù)量的中期細(xì)胞。其優(yōu)點(diǎn)是,操作簡單,同步化程度高,細(xì)胞不受藥物傷害,缺點(diǎn)是獲得的細(xì)胞數(shù)量較少。(分裂細(xì)胞約占1%~2%) 2)細(xì)胞沉降分離法:不同時(shí)期的細(xì)胞體積不同,而細(xì)胞在給定離心場中沉降的速度與其半徑的平方成正比,因此可用離心的方法分離。ATCC細(xì)胞其優(yōu)點(diǎn)是可用于任何懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,缺點(diǎn)是同步化程度較低。

2.誘導(dǎo)同步化

1)DNA合成陰斷法:選用DNA合成的抑制劑,可逆地抑制DNA合成,而不影響其他時(shí)期細(xì)胞的運(yùn)轉(zhuǎn),Z終可將細(xì)胞群阻斷在S期或G/S交界處。5-氟脫氧尿嘧啶、羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度ADR、GDR和TDR,均可抑制DNA合成使細(xì)胞同步化。其中高濃度TDR對S期細(xì)胞的毒性較小,因此常用TDR雙阻斷法誘導(dǎo)細(xì)胞同步化:在細(xì)胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)基中加入過量TDR,(Hela,2mol/L;CHO,7.5mol/L)。S期細(xì)胞被抑制,其它細(xì)胞繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn),Z后停在G1/S交界處。移去TDR。洗滌細(xì)胞并加入新鮮培養(yǎng)液、細(xì)胞又開始分裂。當(dāng)釋放時(shí)間大于TS時(shí),所有細(xì)胞均脫離S期,再次加入過量TDR,細(xì)胞繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)至G1/S交界處,被過量TDR抑制而停止。優(yōu)點(diǎn)是同步化程度高,適用于任何培養(yǎng)體系。可將幾乎所有的細(xì)胞同步化。缺點(diǎn)是產(chǎn)生非均衡生長,個(gè)別細(xì)胞體積增大。

2)中期阻斷法:ATCC細(xì)胞利用破壞微管的藥物將細(xì)胞阻斷在中期,常用的藥物有秋水仙素和秋水仙酰胺,后者毒性較少。優(yōu)點(diǎn)是無非均衡生長現(xiàn)象,缺點(diǎn)是可逆性較差。

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