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上海莼試生物技術有限公司
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如何選擇高品質的原代細胞做實驗?

時間:2018/4/3閱讀:201
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原代細胞越來越受廣大科研者的喜愛,但細胞的生命力不像人們想象中那么強大,在培養復蘇等過程中稍有不慎就不可能導致它的死亡。與此同時越來越多關于細胞的實驗客戶會選用骨髓瘤細胞。原因主要有以下兩點,同時選擇合適的骨髓瘤細胞必須滿足四個條件:
一、骨髓瘤細胞具有無限分裂能力,由于該細胞并非高度分化細胞,因此分裂能力較強,而其它腫瘤細胞分裂能力較弱,因此多在制備單克隆抗體時與B淋巴細胞融合,使單克隆抗體迅速大量增殖。
二、同時骨髓瘤細胞能產生并分泌大量的免疫球蛋白,這樣的瘤細胞融合后,可能影響或降低所分泌抗體的滴度,所以必須選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細胞。
三、選擇骨髓瘤細胞的條件:①該瘤細胞系的來源應與制備脾細胞小鼠為同一品系,以便兩者的組織相容性抗原一致;②骨髓瘤細胞必須是靜息狀態,不產生γ球蛋白或不分泌到細胞外;③骨髓瘤細胞生長需要一個較高的細胞密度,106個細胞/ml;④生長速度快,繁殖時間短。
目前常用的Balb/c小鼠產生的骨髓瘤細胞株有:①S194/5XXO?BU?1;②SP2/0—Ag14(簡稱SP2);③P2—X? ?—Ag8?6?5?3(簡稱653);④FO
以653Z為常用,它是由礦物油4-甲基-15烷(Pristane,降植烷)誘發出來的一種漿細胞瘤(Minerol Oil plasmacy toma,MOPC)并經過培育形成一株8-氮鳥嘌呤有抵抗力的亞系。
原代細胞一般由有關單位直接引入,保存于-195℃液氮罐中,試驗時復蘇、增殖、傳代即可。
由于骨髓瘤細胞是半貼壁狀態,很容易脫落,因此不需要胰酶處理。為了防止出現返祖現象,在融合前,可將培養基內加入15μg/ml 8-氮鳥嘌呤。取約1×107~6×107對數生長期(即培養15h~20h)的骨髓瘤細胞,在室溫離心(400g)10min,沉淀以2.5%FCS—1640液再懸浮并計數。
鑒別    甘氨酸    對照品    110735-200102        200mg
含量測定    芍藥苷    對照品    110736-200526        20mg
含量測定    異補骨脂素    對照品    110738-200511        20mg
含量測定    補骨脂素    對照品    110739-200511        20mg
含量測定    秦皮甲素    對照品    110740-200406        20mg
含量測定    秦皮乙素    對照品    110741-200506        20mg
含量測定    熊果酸    對照品    110742-200516        20mg
原代細胞

 

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