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女貞子LAMP鑒定試劑盒使用方法

時間:2022/8/30閱讀:222
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女貞子LAMP鑒定試劑盒使用方法:


一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)


1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。


2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。


3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。


4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。


5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。


6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。


7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。


二、樣品DNA的制備


8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。


9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。


三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)


10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。


11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

磷酸化雄激素受體抗體

磷酸化A-Raf抗體

酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體

脂肪細胞特異性粘附分子抗體

腺相關病毒5抗體

腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體

腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體

磷酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體

細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體

磷酸化蛋白激酶B2抗體

磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

磷酸化活化復制因子2抗體

磷酸化活化復制因子2抗體

有絲分裂激酶A/B/C抗體

磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體

磷酸化ADP核糖基化因子結合蛋白2抗體

磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體

磷酸化腺泡Acinus蛋白抗體

磷酸化腎上腺素能受體β2抗體

APS抗體

激活素受體樣激酶1抗體

激活素A受體1B抗體

磷酸化雄激素受體抗體

磷酸化A-Raf抗體

酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體

脂肪細胞特異性粘附分子抗體


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