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上海莼試生物技術有限公司
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紫草LAMP鑒定試劑盒使用方法

時間:2023/7/25閱讀:245
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紫草LAMP鑒定試劑盒使用方法:

一、樣品采集:

1、食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照《食品衛生微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進行。

2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。

3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品:取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

注:上述樣品建議經過增菌后,收集培養物用于檢測。?

二、DNA提取:

可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業化產品,并按照相應試劑盒說明進行操作。

1、液體培養物:取液體培養物100μL加到1.5mL無菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進行PCR反應。

2、固體培養物:挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進行PCR反應。

3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。

4、其他液體標本:取標本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。

注:陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議在樣品制備區域加入陽性對照。?

ACVR1B激活素A受體1B抗體

phospho-Androgen Receptor 磷酸化雄激素受體抗體

phospho-A Raf 磷酸化A-Raf抗體

ASAH2酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體

ASAM脂肪細胞特異性粘附分子抗體

AAV5 capsid VP2 protein腺相關病毒5抗體

AMPK gamma 3腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體

AMPK beta 2腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體

phospho-APC1 磷酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體

ANAPC1細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體

phospho-AKT2 磷酸化蛋白激酶B2抗體

phospho-APBB1 磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

phospho-APBB1 磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

phospho-Amyloid Precursor Protein 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

phospho-Amyloid Precursor Protein 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

phospho-ATF2 磷酸化活化復制因子2抗體

phospho-ATF2 磷酸化活化復制因子2抗體

phospho-APC1 磷酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體

ASAP1發育分化增強因子1抗體

phospho-ASAP1 磷酸化發育分化增強因子1抗體

AKT3蛋白激酶B3

Girdin肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體

AKAP2蛋白激酶A2抗體

AT2R2血管緊張素Ⅱ受體2抗體


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