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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第9年

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ATCC細(xì)胞
檢測(cè)試劑盒
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分子生物學(xué)
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標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠骨保護(hù)素(OPG)檢測(cè)試劑盒elisa操作流程

時(shí)間:2023/12/6閱讀:319
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大鼠骨保護(hù)素(OPG)檢測(cè)試劑盒elisa操作流程:


(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。


(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。


(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。


(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。


(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。


(6)洗板,同(4)。


(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。


(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。


(9)洗板,同(4)。


(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。


(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。


(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。


(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。


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