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培養原代細胞的三個注意事項:
1. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言,養細胞就像養孩子一樣,有空就要去看看。細胞越是養不好,就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細胞。培養基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍,形成有利于生長的局部環境。你跑去看細胞,培養瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經常可以看到新手一天到晚都在看細胞,細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管,細胞瘋長。
2. 不要燒瓶口。大多數人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子,覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養基怎么越用越發紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。原代細胞培養基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養基中的碳酸就會轉化成二氧化碳,釋放出來。培養基中的碳酸少了,當然會變堿。如果不燒瓶口的話,你會發現培養液變堿的速度會大大減慢。(當然多多少少還是會有一點越用越堿,因為室溫還是比冰箱內的溫度高)
異丙安替比林 100525-200301 對照品 含量測定用 200mg
羥喜樹堿 100526-200301 對照品 HPLC法含量測定 50mg
賴氨匹林 100527-200401 對照品 UV法含量測定 50mg
愈創木酚甘油醚 100528-200401 對照品 HPLC法含量測定 50mg
草烏甲素 100530-200501 對照品 含量測定(HPLC) 50mg
鹽酸美司坦 100531-200501 對照品 鑒別(TLC) 100mg
喜樹堿 100532-200301 對照品 HPLC法含量測定 50mg
甘露醇 100533-200301 對照品 TLC法鑒別用 100mg
果糖二磷酸鈉 100539-200301 對照品 含量測定 100mg
3. 不要怕消化。在傳代的時候,初學者往往生怕細胞消化過度,早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我師兄在做血管平滑肌原代的時候,37度消化過夜,細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有,動作要輕柔,原代細胞盡量不要產生氣泡。氣泡在破裂時的機械應力相當大,對細胞的傷害也是很大的。
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