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人永生化淋巴細胞;CNLMG-B5538LC培養(yǎng)
公司細胞庫細胞株種類齊全:大鼠腹水癌細胞、腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株,如:人滑膜細胞,人胃癌細胞,人細胞,人腎近曲小管上皮細胞,肝癌細胞,心肌細胞,子宮內膜細胞等。細胞狀態(tài)良好,飽滿,光澤度好,*,專業(yè)技術指導,另有細胞培養(yǎng)類產品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、DMEM、1640培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)瓶等產品。歡迎廣大科研用戶!
細胞名稱 人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2操作步驟
形態(tài)特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞,通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2,Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317,Z后將PA317產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有抗性,但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。
培養(yǎng)條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS
傳代方法 1:4傳代;2~3天換液1次。
傳代情況 P9
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:13;D13S317:9;D16S539:11,12;D18S51:12;D19S433:15,15.2;D21S11:28,30;D2S1338:17,25;D3S1358:16,17;D5S818:12;D7S820:10,11;D8S1179:10,14;FGA:20,22;TH01:9;TPOX:8,9;vWA:17,18;
同工酶
染色體 57~60
使用權限 A類
人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2操作步驟細胞培養(yǎng)
1、冷凍管應如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時, 必須注意安全, 預防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時, 是否應馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外, 絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞), 在解凍之后, 應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細胞大都無法立即適應, 造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源, 所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2操作步驟復蘇操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
分枝桿菌DNAout
土壤DNAout
細菌DNAout(250次)
細菌DNAout(50次)
一步式細菌DNAout
柱式分枝桿菌DNAout
柱式水樣DNAout
柱式土壤DNAout
柱式微生物基因組DNAout
柱式細菌DNAout(50次)
病毒DNA提取
96孔板病毒DNAout(離心法)(1次)
96孔板病毒DNAout(離心法)(5次)
96孔板病毒DNAout(真空法)(見關聯(lián)產品)
M13噬菌體單鏈基因組DNAout(見關聯(lián)產品)
λ噬菌體DNAout(見關聯(lián)產品)
一管式病毒DNA-RNAout
一管式病毒DNAout(200次)
一管式病毒DNAout(50次)
柱式病毒DNAout
經(jīng)典法質粒DNA提取
96孔板質粒DNAout(離心法)
Phospho-Paxillin 磷酸化樁蛋白Paxillin抗體
Phospho-Paxillin 磷酸化樁蛋白Paxillin抗體
phospho-PKC beta 1/2 磷酸化蛋白激酶C β1/β2抗體
PGRMC 孕激素受體膜相關元件抗體
Phospho-p63 磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體
PIG3 p53誘導蛋白3抗體
PPAP2C 磷酸脂磷酸水解酶2抗體
p107 視網(wǎng)膜母細胞瘤樣蛋白p107抗體
phospho-P53 磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體
PIGR 多聚免疫球蛋白受體抗體
PCDHB16 原鈣粘蛋白16抗體
人腎皮質近曲小管上皮細胞;HK-2操作步驟PRSS8
phospho-PAK1/2/3 磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體
Prostaglandin dehydrogenase 1 前列腺素脫氫酶1抗體
phospho-PRKCZ 磷酸化蛋白激酶C抗體
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