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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第9年

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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測(cè)試劑盒>>RNA/DNA提取>> 2μg質(zhì)粒PET32a

質(zhì)粒PET32a

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產(chǎn)品型號(hào)2μg

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-08-02 08:52:30瀏覽次數(shù):157次

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質(zhì)粒PET32a客戶只需提供樣品和待檢測(cè)名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計(jì)并合成引物,完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

具有下列特點(diǎn):
1.
即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2.
引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix
中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4.
提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。

產(chǎn)品名稱

質(zhì)粒PET32a

規(guī)格

2μg

貨號(hào)

CP100414

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93-94)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1.
特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%
2.   
重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%
3.   
靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4.   
實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   
優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6.   
優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
引物擴(kuò)增跨度: 200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.11umol10100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
辛諾柏病毒核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針法)24人份/Tenofovir14712泰諾福韋

胡寧病毒核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針法)24人份/Tenacissoside I1917294通關(guān)藤苷I

乙型流感嗜血桿菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針法)24人份/Tenacissoside H1917295通關(guān)藤苷H

人類免疫缺陷病毒(HIV)核酸定量檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針法)24人份/Tenacissoside G1917293通關(guān)藤苷G

莫氏立克次體核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針法)24人份/Tenacissoside F9281518通關(guān)藤苷F
再生胰島衍生蛋白   英文名稱:   Human Regenerating Islet Derived Protein   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   REG  4-[(4-Methylpiperazin-1-yl) methyl]benzoic acid di  中文名:甲磺酸伊馬替尼  分子式:C13H20Cl2N2O2 

載脂蛋白P   英文名稱:   Apolipoprotein P   英文縮寫:   ApoP   規(guī)格:   48T/96T  Oxymetholone  434-07-1  中文名:康復(fù)龍  分子式:C21H32O3 

載脂蛋白P   英文名稱:   Apolipoprotein P   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   ApoP  Withaphysalin S  中文名:  分子式:C29H40O8 

載脂蛋白M   英文名稱:   Human Apolipoprotein M   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   ApoM  Xanthinol nicotinate  中文名:煙酸占替諾  分子式:C19H26N6O6 

載脂蛋白E   英文名稱:   apolipoprotein/apoprotein E   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   APOE  Withaphysalin S  中文名:  分子式:C29H40O8  度:98.0%
質(zhì)粒PET32a雷公藤定堿 HPLC98% 10mg 冰凍切片組織AKT蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

雷公藤紅素 HPLC98% 20mg RatCiatesyhase,CSELISA試劑盒大鼠檸檬酸合酶(CS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

雷公藤吉堿 HPLC98% 10mg 小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒 ,英文名: LBP ELISA Kit

雷公藤甲素 HPLC98% 20mg 巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyMacrophageInflammatoryProtein-1α,MIP-1αELISAkit 96T/48T

雷公藤氯內(nèi)酯醇 HPLC98% 20mg 犬葡萄糖-6-0酸酶(G6PC)試劑盒 Dog Glucose-6-phosphatase,G6PC ELISA kit

雷公藤內(nèi)酯甲 HPLC98% 20mg 英文名稱HumanAmylinELISAKit人胰淀素(Amylin)規(guī)格:96T/48T

雷公藤內(nèi)酯酮 HPLC98% 20mg 化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達(dá)載體(pGEFP-AM)10微克

雷公藤乙素 HPLC98% 20mg RatHistoneDeacetylase,HDELISA試劑盒大鼠組織蛋白去乙?;?/span>(HD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

雷帕霉素 HPLC98% 20mg 小鼠脂多糖/內(nèi)(LPS)ELISA試劑盒 ,英文名: LPS ELISA Kit

類葉升麻苷 HPLC98% 20mg 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit 96T/48T
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
兩相分離 1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,1530孵育23分鐘。412000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,47000rpm離心5分鐘。
RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。


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