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Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256操作步驟

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更新時間:2017-05-27 11:08:20瀏覽次數(shù):175次

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細胞名稱      Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256操作步驟
形態(tài)特性       實體瘤
生長特性      體內生長
特征特性       常用的大鼠來源瘤株,用于建立大鼠腫瘤移植模型。 
培養(yǎng)條件        -
傳代方法       制備成細胞懸液接種至Wistar大鼠。
傳代情況      不詳
凍存條件       基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測      培養(yǎng)法(-)
STR       -
同工酶      
染色體       -
使用權限      A類
Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256操作步驟細胞培養(yǎng)
1、冷凍管應如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時, 必須注意安全, 預防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時, 是否應馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外, 絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞), 在解凍之后, 應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細胞大都無法立即適應, 造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源, 所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256操作步驟復蘇操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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ells by phosphorylating a number of transcription factors such as ELK1. Phosphorylates EIF4EBP1; required for initiation of translation. Phosphorylates microtubule-associated protein 2 (MAP2). Phosphorylates SPZ1. Phosphorylates heat shock factor protein 4 (HSF4) and ARHGEF2 (By similarity).
Subunit : Interacts with ARHGEF2, NISCH, MORG1 and HSF4 (By similarity). Interacts (phosphorylated form) with CAV2 ('Tyr-19'-phosphorylated form); the interaction, promoted by insulin, leads stlto nuclear location and MAPK1 activation. Interacts with ARRB2. Interacts with ADAM15 (By similarity).
Tissue Specificity : Highest levels within the nervous system, expressed in different tissues, mostly in muscle, thymus and heart.
Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256操作步驟Similarity : Belongs to the protein kinase superfamily. CMGC Ser/Thr protein kinase family. MAP kinase subfamily. 
Contains 1 protein kinase domain. 
激酶和磷酸酶(Kinases and Phosphatases)
絲裂原活化蛋白激酶-ERK(Mitogen-activated protein kinase 1, MAPK-1)是一組可以被多種 

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