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大鼠脈絡膜組織提取物【Choroid: Normal Rat Choroidal Derivatives】 脈絡膜組織在視網膜和鞏膜之間,含有豐富血管和色素細胞。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠脈絡膜組織中高質量的總RNA,PCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產品名稱 | 大鼠脈絡膜組織提取物價格 |
規格 | T25m2 |
貨號 | CS-964362 |
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
110697-44-4 H-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-OH 1mg Jamestown Canyon Virus (JCV)詹姆士城峽谷病毒RT-LAMP試劑盒
110697-44-4 H-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-OH 5mg Jamestown Canyon Virus (JCV)詹姆士城峽谷病毒RT-LAMP試劑盒
110703-94-1 Zopolrestat 10mg Cytoplasmic Polyhedrosis Virus(CPV)質型多角體病毒LAMP試劑盒
110703-94-1 Zopolrestat 1mg Enteropathogenic E.coli(EPEC)腸致病性大腸桿菌(大腸埃希氏菌)LAMP試劑盒
110703-94-1 Zopolrestat 5mg Enteropathogenic E.coli(EPEC)腸致病性大腸桿菌(大腸埃希氏菌)LAMP試劑盒
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-C4阿扎那韋Atazanavir質量規格:≥99.0%
T-47D細胞,管癌細胞 食管癌細胞,EC871214細胞 大鼠骨肉瘤細胞;UMR-106阿卡地新(AICAR)Acadesine質量規格:>98%,BR
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B1蒲公英萜醇;蒲公英賽醇(標準品)Taraxerol質量規格:HPLC≥98%,標準品
CDH2 Others Human Cadherin-2 / CD325 / CDH2 / NCAD 細胞裂解液 (陽性對照) 琥珀酸普卡必利Prucalopride Succinate質量規格:>98%,BR
肺成纖維細胞;HFL1鹽酸納洛酮Naloxone HCl dihydrate質量規格:>98%,二水合物,1類受體拮抗劑
大鼠脈絡膜組織提取物價格胚腎二倍體細胞;HEK-2氯冉酸(>98.0%(HPLC)(T))質量規格:>98.0%(HPLC)(T)Chloranilic Acid
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/New Caledonia/20/1999) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細胞裂解液 (陽性對照) 焦棓酚紅質量規格:螯合劑Pyrogallol Red
CL-0387MS751(頸表皮癌細胞)5×106cells/瓶×2鋅試劑質量規格:螯合劑Zincon
S100A6 Others Human S100A6 / CACY 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N--N-硅基乙酰胺(>92.0%(GC))質量規格:>92.0%(GC)N-Methyl-N-TMS-acetamide
虹膜色素上皮細胞總RNAHIPEpiC NAN-基硅基咪唑(>98.0%(T))質量規格:>98.0%(T)N-Trimethylsilylimidazole
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
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