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上海莼試生物技術有限公司
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人支氣管組織提取物說明

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具體成交價以合同協議為準

產品型號T25m2

品       牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-06-21 20:31:42瀏覽次數:205次

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人支氣管組織提取物說明如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

我公司提供原代細胞、細胞系、細胞株和菌種,細胞庫管理規范,提供的細胞株背景清楚,提供參考文獻和*培養條件。純度可達 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品名稱

規格

貨號

人支氣管組織提取物說明

T25m2

CS-964219

人支氣管組織提取物【Lung: Normal Human Bronchial Derivatives】支氣管表面的上皮細胞構成了基底柱狀結構,能清除粘液纖毛。產生和分泌大量化學介質和細胞因子形成高度復雜的宿主防御系統等主要功能。公司科技提供來自新鮮或冷凍人支氣管組織中高質量的總RNA,PCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院,采集工作根據IRBHIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mgRNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
細胞處理:
1 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞處理方法:
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據到貨時細胞密度,細胞生長狀態等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術指導,請及時電話或郵件聯系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養瓶應預留一部分培養基繼續培養。
嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養瓶,37,5%CO2  培養。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4. 將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養瓶和新鮮培養基,37,5%CO2  培養113168-57-3  Linopirdine dihydrochloride  10mg  Human Metapneumo Virus(hMPV)偏肺病毒RT-LAMP試劑盒 

113168-57-3  Linopirdine dihydrochloride  1mg  Cooperia spp.古柏線蟲通用LAMP試劑盒 

113168-57-3  Linopirdine dihydrochloride  5mg  Human Metapneumo Virus(hMPV)偏肺病毒RT-LAMP試劑盒 

113170-55-1  L-Ascorbic Acid 2-phosphate (magnesium salt)  100g  Norwalk Viruses G4(NV-4)諾如病毒G4RT-LAMP試劑盒 

113170-55-1  L-Ascorbic Acid 2-phosphate (magnesium salt)  10g  Norwalk Viruses G5(NV-5)諾如病毒G5RT-LAMP試劑盒
大鼠胎兒成纖維細胞*培養基 100mL溴化鈉 bromide質量規格:>99%,AR

Vero非洲綠猴腎細胞 Vero the African green monkey kidney cells MEM培養基(GIBCO)+10%FBSD-α-氨基己二酸D-a-Aminoadipic acid質量規格:0.97

IFNW1 Protein Human 重組 IFN omega 1 / IFNW1 蛋白 (His 標簽)D-高苯丙氨酸D-Homophenylalanine質量規格:>90%(T),BR

L W-3A(小鼠皮下結締組織細胞) 5×106cells/瓶×2 HeLa [ Chang Liver ](張氏肝細胞)D-焦谷氨酸D-Pyroglutamic acid質量規格:0.98

膀胱平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)D-環丙基丙氨酸D-Cyclopropylalanine質量規格:BR
人支氣管組織提取物說明WI38/VA13(SV-40Z轉化肺成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞胭脂紅質量規格:BS,用于生物學染色Carmine

CM-R073大鼠心肌細胞*培養基100mL溴酚紅質量規格:ARBromophenol red

FGFR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 FGFR1 細胞裂解液 (陽性對照) 硫鋅酸質量規格:>98%Alphalipoic acid

小鼠腦膜細胞MMenC硫辛酸(標準品)質量規格:HPLC98%,標準品Alphalipoic acid

JAR細胞,胎盤絨毛癌細胞 小鼠成纖維細胞,C3H 10T1/2 2A6細胞 纖維環細胞HAFC鹽酸氨溴索質量規格:>98%,BRAmbroxol HCl
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640GIBCO,貨號21875-091)90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37,培養箱濕度為70%-80%
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1213的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。

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