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收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
人胚胎滋養層組織提取物【Human Placental:Normal Placenta Trophoblast Derivatives】胚胎滋養層是母親內膜和發育中胚胎之間的營養通路。緊貼在壁的滋養層是胚胎著床,隨后形成胎盤。公司科技提供來自新鮮或冷凍人胚胎滋養層組織中高質量的總RNA,PCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院,采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產品名稱 | 人胚胎滋養層組織提取物直銷 |
規格 | T25m2 |
貨號 | CS-964229 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
1129403-56-0 Amcasertib 1mg Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒B亞群RT-LAMP試劑盒
1129403-56-0 Amcasertib 50mg Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒通用RT-LAMP試劑盒
1129403-56-0 Amcasertib 5mg Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒A亞群RT-LAMP試劑盒
112953-11-4 UCN-01 1mg Rhizopus microspous小孢子酒曲菌LAMP試劑盒
112955-31-4 pTH-Related Protein (1-34) amide (human, mouse, rat) 0.5mg Rhizopus microspous小孢子酒曲菌LAMP試劑盒
恒河猴腎細胞;RM-26-O-α-D-麥芽糖基-β-環糊精(>98.0%(HPLC))6-O-α-D-Maltosyl-β-cyclodextrin質量規格:>98.0%(HPLC)
LRG1 Others Human LRG1 細胞裂解液 (陽性對照) 基-β-環糊精(>98.0%(HPLC))Trimethyl-β-cyclodextrin質量規格:>98.0%(HPLC)
胰腺星狀細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)3,5-雙[3,5-雙(芐氧基)芐氧基]芐溴(>97.0%(HPLC))3,5-Bis[3,5-bis(benzyloxy)benzyloxy]benzyl Bromide質量規格:>97.0%(HPLC)
JEG-3/VP16-TNFa細胞,絨癌細胞VP16耐藥株TNFa轉染 癌細胞,SK-BR-3細胞 成纖維細胞生長添加物-2FGS-23,5-雙(3,5-二甲氧基芐氧基)芐醇(>94.0%(GC))3,5-Bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyl Alcohol質量規格:>94.0%(GC)
水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S13,5-雙(3,5-二甲氧基芐氧基)芐溴(>97.0%(HPLC)(T))3,5-Bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyl Bromide質量規格:>97.0%(HPLC)(T)
人胚胎滋養層組織提取物直銷NRG1 Protein Human 重組 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標簽)交叉縫式碳納米管 10-20nm(直徑),5-15μm(長度)質量規格:>95%(TPO Method)Carbon Nanotube Herringbone 10-20nm(diam.), 5-15µm(length)
NCI-H460(肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 腎動脈內皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)復壁碳納米管 小于10nm(直徑),5-15μm(長度)(允許溫度上限:620℃)質量規格:Carbon Nanotube Bundled Multi-walled below 10nm(diam.), 5-15µm(length) (allowable temperature limit : 620°C)
支原體PCR檢測試劑盒MYCO復壁碳納米管 小于10nm(直徑),5-15μm(長度)質量規格:>95%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled below 10nm(diam.), 5-15µm(length)
IL12A & IL12B Others Human IL12A & IL12B Heterodimer 細胞裂解液 (陽性對照) 復壁碳納米管 小于10nm(直徑),1-2μm(長度)質量規格:>95%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled below 10nm(diam.), 1-2µm(length)
CatS2 家貓皮膚成纖維樣細胞雙(亞二硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]質量規格:Bis(methylenedithio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]
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