大鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物【Rat Brain: Normal Cerebral Venous Vascular Smooth Muscle Cells Derivatives】 大鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物是從大鼠原代腦靜脈血管平滑肌細胞提取的，大鼠原代腦靜脈血管平滑肌細胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。

收到凍存細胞的處理方法：
1.37°C水浴預熱培養基；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續暖細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中，輕輕晃勻；
5.置于37°C，5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。

實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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SW480 [SW-480]結腸腺癌細胞 SW480 [SW-480] human colon adenocarcinoma cells 1640+10% FBSβ-D-葡糖糖-6-1酸鈉鹽D-Glucose 6-phosphate  salt 質量規格：98%，美國進口

CD40LG Protein Rat 重組大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(美侖)Coenzyme II reduced tetra salt(NADPH)質量規格：>97%,國產美侖

羊膜上皮細胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原細胞 Mouse葡萄糖氧化酶Glucose oxidase質量規格：BR,>200U/mg

癌細胞;MCF7溶菌酶(蛋清)Lysozyme,from egg white質量規格：2萬U/mg,分子生物學級

臍靜脈內皮細胞(HVVEC)( 5×105 )HRP;辣根過氧化物酶Peroxidase, Horseradish(HRP)質量規格：BR,RZ>2.5,活性>250U/mg
大鼠腦靜脈血管平滑肌細胞提取物直銷牛腎細胞;MDBK隱色孔雀石綠（標準品）質量規格：分析標準品Leucomalachite Green

CSF1R Others Human  M-CSFR 細胞裂解液 (陽性對照) 二十酸甲酯（標準品）質量規格：≥98.0%(GC)Methyl Arachidate

CM-H132小梁網細胞*培養基100mL反式玉米素質量規格：>99%,BR,可用于細胞培養trans-Zeatin

IFNAR1 Others Human  IFNAR1 / IFNAR 細胞裂解液 (陽性對照) 氯亞鉑酸鉀 質量規格：BR,鉑含量 ≥46%,原始鉑粉度＞99.95% Dipotassium tetrachloroplatinate

小鼠表皮色素細胞*培養基 100mL環黃芪醇質量規格：HPLC≥98%，標準品Cycloastragenol
注意事項：
1.接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色
，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。