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收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
小鼠主動脈平滑肌細胞提取物【Mouse Aorta: Normal Aortic Smooth Muscle Cell Derivatives】小鼠主動脈平滑肌細胞提取物是從小鼠主動脈平滑肌細胞提取的,小鼠主動脈平滑肌細胞從正常小鼠主動脈組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產品名稱 | 小鼠主動脈平滑肌細胞提取物價格 |
規格 | T25m2 |
貨號 | CS-964074 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
115-33-3 Oxyphenisatin acetate 50mg Haemophilus spp.嗜血桿菌通用LAMP試劑盒
587-56-4 3,4-Dichloro-Phe-OH 100g Herba cirsii japonici大薊LAMP鑒定試劑盒
587-56-4 3,4-Dichloro-Phe-OH 25g Folium isatidis 大青葉LAMP鑒定試劑盒
587-56-4 3,4-Dichloro-Phe-OH 5g Folium isatidis 大青葉LAMP鑒定試劑盒
115338-32-4 NAN-190 hydrobromide 50mg Aleutian Disease Virus(ADV)阿留申病病毒LAMP試劑盒
Hut-102細胞,T瘤細胞系 Walker氏癌肉瘤256瘤株,W256細胞 小氣道上皮細胞裂解物HSAEpiCL迷迭香酸(標準品)Rosmarinic acid質量規格:HPLC≥98%,標準品
NCI-H226(肺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2綿馬貫眾素ABBA(標準品)Dryocrassin ABBA質量規格:HPLC≥98%,標準品
Caov-3(乳突狀卵巢腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0070CRFK(貓腎細胞)5×106cells/瓶×2 615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM7552’-脫氧鳥苷;2'-dG2'-Deoxyguanosine monohydrate質量規格:>98%,BR
間充質干細胞-脂肪DMSC-ad2‘-脫氧胞苷2'-Deoxycytidine;2'-dC質量規格:>98%,BR
DUSP3 Others Human DUSP3 / VHR 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 2‘-脫氧胞苷(標準品)2'-Deoxycytidine;2'-dC質量規格:HPLC>98%,標準品
小鼠主動脈平滑肌細胞提取物價格MDCK(犬腎細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CRELD2 細胞裂解液 (陽性對照) 5,7-二氯-8-羥基喹哪啶;氯喹那多質量規格:>98%,BRChlorquinaldol
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A癸氧喹酯;乙癸氧喹酯質量規格:>99(T)Decoquinate
DCLK1 Others Human DCAMKL1 / DCLK1 (aa 1-705) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (S)-2-氨基-5-甲氧基四氫萘鹽酸鹽 質量規格:>98%(S)-2-Amino-5-methoxytetralin
CL-0057CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞)5×106cells/瓶×2巴馬司他;BB94質量規格:>98%,MMP(基質金屬蛋白酶)抑制劑Batimastat(BB-94)
U266B1 [U266], 多發性骨髓瘤細胞 骨肉瘤細胞,Saos-2細胞 CFPAC-1(胰腺癌細胞)頭孢克1(標準品)質量規格:>98%,標準品Cefixime
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