參數規格：

產品名稱：轉基因品系油菜PHY14探針法qPCR試劑盒
貨號:CP97218
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

以下是轉基因品系油菜PHY14探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
anti- DDX21 antibody資源名稱尖鐮孢萎蔫?；停ㄐ泵妫┓N屬:Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum提供形式:試管斜面安全等級:1模式菌株:no應用領域:棉花枯萎病菌培養方法培養基:綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3g，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL，備用。生長條件:24-28℃，好氧

anti- DDX23 antibody資源名稱乙酰微小桿菌(乙酰短桿菌)種屬:Exiguobacterium│acetylicum提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:2生長條件:30℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；定期移植法

anti- DDX24 antibody資源名稱爭論貪噬菌種屬:Variovorax│paradoxus分離基物:土壤提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:分類、研究，可以用來研發生產生物肥料。培養方法培養基:65

anti- DDX25 antibody資源名稱柱狀黃桿菌種屬:Flavobacterium│columnare分離基物:天牛腸道提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:飼料用纖維素酶、植酸酶、木聚糖酶等的篩選培養方法培養基:2

anti- DDX27 antibody資源名稱阿姆斯特丹散囊菌種屬:Eurotium│amstelodami提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:14生長條件:25-28℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

anti- DDX28 antibody資源名稱長剛毛擬盤多毛孢種屬:Pestalotiopsis│longiseta提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:14生長條件:25℃

anti- DDX3 antibody資源名稱鄔氏不動桿菌種屬:Acinetobacter│ursingii分離基物:土壤提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:在無機鹽培養基:中以500mg/L的苯酚一碳源培養，84h內對500mg/L的苯酚降解率99%培養方法培養基:2

anti- DDX39 antibody資源名稱水生叢毛單胞菌種屬:Comamonas│aquatica分離基物:土壤提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:能于30℃、1000ppm的十八烷烴無機鹽培養基:中，72小時降解率約為80％，十八烷烴為碳源(無機鹽培養基:)培養方法培養基:33

anti- DDX3Y antibody資源名稱異型德克酵母種屬:Dekkera│anomala分離基物:啤酒提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes培養方法培養基:436生長條件:25-28℃

anti- DDX4/VASA antibody資源名稱扣囊擬內孢霉=扣囊復膜孢酵母種屬:Endomycopsis│fibuligera提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:13生長條件:25-28℃

anti- DDX43 antibody資源名稱人參刺盤孢(人參炭疽病菌)種屬:Colletotrichum│panacicola提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:14生長條件:24-25℃

anti- DDX46 antibody資源名稱粉紅粘帚霉種屬:Gliocladium│roseum提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:14生長條件:25-28℃

anti- DDX49 antibody資源名稱蠟葉散囊菌種屬:Eurotium│herbariorum提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:14生長條件:25℃

anti- DDX5,p68 antibody資源名稱麥根腐平臍蠕孢種屬:Bipolaris│sorokiniana提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:14生長條件:18-22℃

anti- DDX50 antibody資源名稱紫紅絲膜菌（斜面）種屬:Cortinarius rufo-olivaceus提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3g，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長條件:25℃，好氧存儲條件:液氮超低溫凍結法；礦物油法；定期移植法

anti- DDX51 antibody資源名稱雙芽胞桿菌種屬:Amphibacillus│sp.分離基物:土壤提供形式:斜面培養物模式菌株:no應用領域:檢測生產培養方法培養基:2生長條件:30-37℃

anti- DDX52 antibody資源名稱棲稻假單胞菌種屬:Pseudomonas│oryzihabitans分離基物:土壤提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:可以在含1000mg/l的芐磺隆的無機鹽培養基:中生長培養方法培養基:33

anti- DDX56 antibody資源名稱粘金黃菌（不提供）種屬:Chryseobacterium│gleum分離基物:土壤提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:2生長條件:35℃
轉基因品系油菜PHY14探針法qPCR試劑盒大鼠 TSGF Human CYP2B6(Cytochrome P450 2B6) ELISA Kit0.188ng/ml0.312-20ng/ml

大鼠 TSG-6 Human MMP11(Matrix Metalloproteinase 11) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

大鼠TRAIL-R4 Human CYP2D6(Cytochrome P450 2D6) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

大鼠TRAIL R3 Human PRSS2(Trypsin-2) ELISA Kit0.469ng/ml0.781-50ng/ml

大鼠TRAIL-R1 Human CDO1(Cysteine dioxygenase type 1) ELISA Kit0.191ng/ml0.5-32ng/ml

大鼠 TRAIL Human KLF13(Krueppel-like factor 13) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

大鼠 TNFRSF11A/RANK Human KLF14(Krueppel-like factor 14) ELISA Kit0.094nmol/L0.156-10pmol/ml