參數規格：

產品名稱：轉基因品系玉米BT176探針法qPCR試劑盒
貨號:CP97278
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

以下是轉基因品系玉米BT176探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
anti- Galectin-1 antibody資源名稱婁地青霉種屬:Penicillium│roquefoeti thom提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:用作檢測菌。培養方法培養基:CM0015生長條件:25C

anti- Galectin-3 antibody資源名稱紫色鏈霉菌種屬:Streptomyces│violaceus分離基物:土壤提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:CM0039生長條件:28C

anti- Galectin-3 antibody資源名稱金霉素鏈霉菌種屬:Streptomyces│aureofaciens提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:產生Tetracycline四環素培養方法培養基:CM0136生長條件:36C

anti- Galectin-7 antibody資源名稱糞腸球菌種屬:Enterococcus faecalis提供形式:凍干物安全等級:2模式菌株:no應用領域:研究；教學；分類；分析檢測培養方法培養基:哥倫比亞血平板生長條件:37℃，好氧。

anti- GALK1 antibody資源名稱葡萄球菌種屬:Staphylococcus│sp.提供形式:凍干物安全等級:3模式菌株:no應用領域:噬菌體研究　　80(噬菌體)培養方法培養基:CM0051生長條件:37℃

anti- GALK2 antibody海洋微生物菌種海洋微生物菌種海洋微生物菌種

anti- GALM antibody資源名稱座囊菌種屬:Dothideomycetes│sp.分離基物:水樣/深層海水提供形式:斜面培養物模式菌株:no應用領域:大洋絲狀真菌培養方法培養基:475生長條件:25℃

anti- GALNS antibody資源名稱副凝膠短狀桿菌種屬:Brachybacterium│paraconglomeratum分離基物:沉積物/多管沉積物（5-10cm）提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:大洋細菌培養方法培養基:471

anti- GALNT14 antibody資源名稱解單端孢菌素微桿菌種屬:Microbacterium│trichotecenolyticum分離基物:沉積物/日本海溝沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:生物活性微生物/潛在的抗腫瘤活性培養方法培養基:1003生長條件:28℃

anti- GALNT4 antibody資源名稱脫氮叢毛單胞菌種屬:Comamonas│denitrificans分離基物:沉積物/表層沉積物提供形式:斜面培養物模式菌株:no應用領域:有機污染物降解菌/苯酚、間甲酚降解菌（已驗證）培養方法培養基:33生長條件:28℃

anti- GALNT7 antibody資源名稱哈氏弧菌（原：鯊魚弧菌）種屬:Vibrio│harveyi分離基物:生物樣/鯊魚的腎提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes應用領域:參考菌株/分類研究；本菌株是鯊魚弧菌（Vibrio carchariae）的模式菌株:,鯊魚弧菌現組合為哈維氏弧菌（Vibrio harveyi）培養方法培養基:471

anti- GALNT9 antibody資源名稱嚙齒類檸檬酸桿菌種屬:Citrobacter│murliniae分離基物:生物樣/暗紋東方鲀/肝臟提供形式:斜面培養物模式菌株:no應用領域:共生微生物/暗紋東方鲀肝臟共生菌培養方法培養基:471生長條件:25℃

anti- GALNTL2 antibody資源名稱食物魏斯氏菌種屬:Weissella│cibaria分離基物:生物樣/魚腸道內容物提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:1.生物活性物質篩選； 2.魚腸道微生態研究。培養方法培養基:821

anti- GALNTL5 antibody資源名稱奧奈達湖希瓦氏菌種屬:Shewanella│oneidensis分離基物:沉積物提供形式:凍干物模式菌株:yes應用領域:模式菌株:培養方法培養基:471生長條件:25℃

anti- GALP antibody資源名稱農研所芽孢桿菌種屬:Bacillus│niabensis分離基物:水樣/表層海水提供形式:斜面培養物模式菌株:no應用領域:近海細菌培養方法培養基:471生長條件:20-25℃

anti- GALT antibody資源名稱路氏腸桿菌種屬:Enterobacter│ludwigii分離基物:沉積物/電視抓斗的乳黃色鈣質軟泥提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:微生物/耐壓菌；產酶微生物/淀粉酶培養方法培養基:1001生長條件:25℃

anti- gamma Actin antibody資源名稱帚狀曲霉種屬:Aspergillus│penicillioides分離基物:沉積物/TVG沉積物提供形式:斜面培養物模式菌株:no應用領域:大洋絲狀真菌培養方法培養基:14生長條件:25℃

anti- Gamma adaptin antibody資源名稱匐枝青霉種屬:Penicillium│stoloniferum分離基物:生物樣/海鞘提供形式:斜面培養物模式菌株:no應用領域:可做抑真菌、抑腫瘤研究。培養方法培養基:475生長條件:18－20℃
轉基因品系玉米BT176探針法qPCR試劑盒大鼠 UGT1 Human RGS7(Regulator of G-protein signaling 7) ELISA Kit0.188ng/ml0.313-20ng/ml

大鼠 OCT Human APOL1(Apolipoprotein L1) ELISA Kit0.469ng/ml0.78-50ng/ml

大鼠 VCL Human DDT(D-Dopachrome Tautomerase) ELISA Kit0.188ng/ml0.313-20ng/ml

大鼠glycosaminoglycan/mucopolysaccharide Human LRP11(Low-density lipoprotein receptor-related protein 11) ELISA Kit0.188ng/ml0.312-20ng/ml

大鼠 BDNF Human RIPK1(Receptor interacting serine/threonine kinase 1) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

大鼠 BNP Human KIAA1377(Uncharacterized protein KIAA1377) ELISA Kit4.688ng/ml7.8-500ng/ml

大鼠 NGB Human PDIA4(Protein disulfide-isomerase A4) ELISA Kit0.938ng/ml1.56-100ng/ml