使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數規格：

產品名稱：轉基因品系馬鈴薯SEMT5-15 PCR試劑盒
貨號:CP97048
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉基因品系馬鈴薯SEMT5-15 PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Mouse MSP/MST1 ELISA Kit資源名稱沃氏水單胞菌種屬:Aquimonas│voraii分離基物:沉積物/表層沉積物

Mouse NRP1(Neuropilin-1) ELISA Kit資源名稱運動替斯崔納菌種屬:Tistrella│mobilis分離基物:水樣/深海底層水樣

Mouse NGF/NGFβ(Nerve growth factor) ELISA Kit資源名稱海底嗜冷桿菌種屬:Psychrobacter│submarinus分離基物:沉積物/表層沉積物

Mouse OPG(Osteoprotegerin) ELISA Kit資源名稱熱殺索絲菌種屬:Brochothrix│thermosphacta分離基物:土壤/南極土壤

Mouse OPN(Osteopontin) ELISA Kit資源名稱哈夫尼菌種屬:Hafnia│paralvei分離基物:土壤/南極土壤

Mouse PCSK9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9) ELISA Kit資源名稱殺真菌鏈霉菌種屬:Streptomyces│globisporus分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse PECAM-1/CD31(Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit資源名稱嗜冷桿菌種屬:Psychrobacter│sp.分離基物:土壤/南極土壤

Mouse PGRN(Progranulin) ELISA Kit資源名稱黑沙假單胞菌種屬:Pseudomonas│sabulinigri分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse PRL(Prolactin) ELISA Kit資源名稱海動物腸希瓦氏菌種屬:Shewanella│marinintestina分離基物:Squid body

Mouse SELP(P-Selectin) ELISA Kit資源名稱猜也蓬府小單胞菌種屬:Micromonospora│chaiyaphumensis分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Mouse PTX3/Pentraxin 3(Pentraxin-related protein PTX3) ELISA Kit資源名稱廈門鏈霉菌種屬:Streptomyces│xiamenensis分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse RANκ(Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit資源名稱灰黃鏈霉菌種屬:Streptomyces│griseoflavus分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Mouse Rantes(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit資源名稱白酒紅鏈霉菌種屬:Streptomyces│albovinaceus分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Mouse RBP4(Retinol Binding Protein 4, Plasma) ELISA Kit資源名稱雅加達鏈霉菌種屬:Streptomyces│djakartensis分離基物:土壤/近海紅樹林土壤

Mouse RXFP1(Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit資源名稱鼠尾菌種屬:Muricauda│sp.分離基物:水樣/表層海水

Mouse RETN(Resistin) ELISA Kit資源名稱氧化木糖無色桿菌種屬:Achromobacter│xylosoxidans分離基物:水樣/表層海水

Mouse SAA(Serum amyloid A) ELISA Kit資源名稱食烷菌種屬:Alcanivorax│sp.分離基物:水樣/表層海水

Mouse SCF(Stem Cell Factor) ELISA Kit資源名稱脫氮嗜脂環物菌種屬:Alicycliphilus│denitrificans分離基物:沉積物/表層沉積物

Mouse SP-D(Pulmonary Surfactant Associated Protein D) ELISA Kit資源名稱潮汐別樣希瓦氏菌種屬:Alishewanella│aestuarii分離基物:沉積物/表層沉積物

Mouse SDF-1(Stromal Cell Derived Factor 1) ELISA Kit資源名稱羅氏極小單胞菌種屬:Pusillimonas│noertemannii分離基物:沉積物/表層沉積物
轉基因品系馬鈴薯SEMT5-15 PCR試劑盒anthrax toxin receptor 1|ANTXR1|ATR|TEM8|Tumor endothelial marker 8形態特性  成纖維細胞生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞系是由C. Reznikoff等（1972）從C3H系小鼠胚胎細胞分離。此細胞對過度長滿的細胞有絲分裂抑制非常敏感，在同源小鼠中不產生腫瘤，無自然轉化的背景，也不含明顯內源性轉化鼠類白血病或肉瘤病毒。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優質胎牛血清，10%

DIO1|Type I iodothyronine deiodinase|Type-I 5'-deiodinase|Type 1 DI|5DI|DIOI形態特性 生長特性 貼壁生長特征特性  MS1是1994年建株的胰島內皮細胞株。原代培養的胰島內皮細胞用抗G418的溫度敏感型SV40大T抗原(tsA-58-3)轉染。抗性克隆用克隆環分離，并篩選吸收dil-Ac-LDL的。這株細胞保留了內皮細胞的許多特性，如吸收乙 酰化LDL和表達八因子相關抗原及BEGF受體。 培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優質胎牛血清，5%

DIO3|Type III iodothyronine deiodinase|Type-III 5'-deiodinase|Type 3 DI|5DIII|DIOIII形態特性  心肌成纖維細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  這株細胞的細胞骨架染色突出呈現肌動蛋白，在細胞質中有豐富的平行微絲。 有報道稱在1uM血管緊張素II存在下，它們會收縮。 細胞在軟瓊脂中形成克隆，SV40大T抗原陽性。 培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優質胎牛血清，5%；14mM HEPES

NPFFR2|Neuropeptide FF receptor 2|Neuropeptide G-protein coupled receptor|G-protein coupled receptor 74|G-protein coupled receptor HLWAR77形態特性 生長特性 貼壁生長特征特性  在用鳥氨酸和苯丙氨酸代替精氨酸和酪氨酸的平板上選擇建立了這株細胞。檢測表明肢骨發育畸形病毒(鼠痘)陰性。 培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優質胎牛血清，10%

ADORA1|Adenosine receptor A1形態特性  成纖維細胞生長特性 貼壁生長特征特性  這株細胞生成一種可以感染小鼠細胞的載體。 Psi2 DAP細胞生成的載體編碼了人類胎盤堿性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因。 這株細胞通過Psi2細胞插入一個重組的逆轉錄病毒(DAP)基因組衍生而來。 被這種Psi2 DAP產生的載體感染的細胞表達的磷酸酯酶可用組織化學方法檢測，可以用作體內追蹤他們命運的標記。 這些細胞也可能產生輔助病毒。 檢測輔助病毒的方法或其他逆轉錄病毒技術，請參考Cepko, C.L. Lineage analysis and immortalization of neura 培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優質胎牛血清，10%

ATRN形態特性  成纖維細胞生長特性 貼壁生長特征特性  L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表達載體轉染并在含G418的培養基中篩選穩轉株。 Wnt-3A基因編碼一個有變異的信號功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎發過程中的許多模式形成和生長事件。 這些細胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。 它們是目前生產Wnt-3A條件培養基的好來源。 由于這種條件培養基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對于涉及Wnt-3A條件培養基的實驗有必要用其來源細胞株(ATCC CRL-2648)作對照。 培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優質胎牛血清，10%；0.4 mg/ml G-418

ADORA2A|Adenosine receptor A2a形態特性  成纖維細胞生長特性 貼壁生長特征特性  1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠結締組織)，細胞系L的克隆。細胞系L是Z早建立的連續培養細胞系之一，而clone 929是Z早的克隆株。 從一只100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松結締組織入脂肪組織中建立了親本細胞系L。 第95代的細胞系L使用毛細管法分離單細胞建立了clone929。 檢測發現鼠痘病毒陰性。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  馬血清，10%

NODAL|Nodal homolog形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  可產生單克隆抗體，抗人單核細胞。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS