實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數規格：

產品名稱：轉基因品系馬鈴薯SEMT5-15探針法qPCR試劑盒
貨號:CP97050
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。

以下是轉基因品系馬鈴薯SEMT5-15探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Mouse 5-LO(Arachidonate 5-Lipoxygenase) ELISA Kit資源名稱太平洋玫瑰變色菌種屬:Roseovarius│pacificus分離基物:水樣/深海底層水樣

Mouse VEGFB(Vascular endothelial growth factor B) ELISA Kit資源名稱樊氏鹽單胞菌種屬:Halomonas│ventosae分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse VEGFC(Vascular endothelial growth factor C) ELISA Kit資源名稱廣陽灣科迪單胞菌種屬:Kordiimonas│gwangyangensis分離基物:水樣/深海底層水樣

Mouse Cga(Glycoprotein hormones alpha chain) ELISA Kit資源名稱格爾納不動桿菌種屬:Acinetobacter│gerneri分離基物:沉積物/污水處理廠活性污泥

Mouse Tshβ(Thyrotropin subunit beta) ELISA Kit資源名稱停滯短桿菌種屬:Brevibacterium│stationis分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse BMP-4(Bone morphogenetic protein 4) ELISA Kit資源名稱消化嗜冷桿菌種屬:Psychrobacter│alimentarius分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse BMP-7(Bone morphogenetic protein 7) ELISA Kit資源名稱檸檬球菌種屬:Citricoccus│sp.分離基物:水樣/海水

Mouse Il-11(Interleukin-11) ELISA Kit資源名稱動性球菌種屬:Planococcus│sp.分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse Cntf(Ciliary neurotrophic factor) ELISA Kit資源名稱阿穆斯基灣鹽水桿菌種屬:Salinibacterium│amurskyense分離基物:沉積物/深海沉積物

Mouse Sele(E-selectin) ELISA Kit資源名稱海葵黏著桿菌種屬:Tenacibaculum│aiptasiae分離基物:生物樣/海葵（患病的）

Mouse Hgf(Hepatocyte growth factor) ELISA Kit資源名稱海濱玫瑰桿菌種屬:Roseobacter│litoralis分離基物:不詳

Mouse Lif(Leukemia inhibitory factor) ELISA Kit資源名稱緩慢油螺旋菌種屬:Oleispira│lenta分離基物:水樣/海水

Mouse MMP-7(Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit資源名稱玫瑰色鮮艷菌（加詞待譯）種屬:Roseivivax│halotolerans分離基物:生物樣/附生植物

Mouse MMP-8(Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit資源名稱維多利亞港革蘭氏菌種屬:Gramella│portivictoriae分離基物:沉積物/海洋沉積物

Mouse Pgf(Placenta growth factor) ELISA Kit資源名稱肝弧菌種屬:Vibrio│hepatarius分離基物:生物樣/南美白對蝦(凡納濱對蝦)

Mouse SCFR(Mast/stem cell growth factor receptor Kit) ELISA Kit資源名稱多態生絲單胞菌種屬:Hyphomonas│polymorpha分離基物:生物樣/鼻腔粘膜(nasal mucous)

Mouse TNFRSF1a(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A) ELISA Kit資源名稱殺香魚假單胞菌種屬:Pseudomonas│plecoglossicida分離基物:水樣/近海海水

Mouse TNFRSF1b(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B) ELISA Kit資源名稱食吡啶紅球菌種屬:Rhodococcus│pyridinivorans分離基物:水樣/近海海水

Mouse MTOR(Serine/threonine-protein kinase mTOR ) ELISA Kit資源名稱拉恩氏菌種屬:Rahnella│sp.分離基物:土壤/南極土壤

Mouse Ahsg(Alpha-2-HS-glycoprotein) ELISA Kit資源名稱鳥桿菌種屬:Avibacterium│sp.分離基物:生物樣/野生鯔魚腸道內容物
轉基因品系馬鈴薯SEMT5-15探針法qPCR試劑盒AP1M1|AP-1 complex subunit mu-1|Clathrin coat-associated protein AP47|Clathrin coat assembly protein AP47|Clathrin assembly protein complex 1 medium chain 1|Adaptor-related protein complex 1 mu-1 subunit|Mu1A-adaptin|Mu-adaptin 1|AP-mu chain family member mu1A|Adaptor protein complex AP-1 mu-1 subunit形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  可產生抗人小細胞肺癌的單克隆抗體。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS

AP2B1|AP-2 complex subunit beta|Clathrin assembly protein complex 2 beta large chain|Beta-adaptin|Beta-2-adaptin|Adaptor protein complex AP-2 subunit beta|AP105B|Adapter-related protein complex 2 beta subunit形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  可產生抗小鼠巨噬細胞的單克隆抗體Mac-2 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS

COTL1|Coactosin-like protein形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  可產生抗LFA-1，Mac-1 β亞基的單克隆抗體。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS

CD83 antigen形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  可產生抗人絨毛膜促性腺激素β-HCG的單克隆抗體 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS

DLG4|Disks large homolog 4|Postsynaptic density protein 95|PSD-95|Synapse-associated protein 90|SAP-90|SAP90形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  可產生抗人絨毛膜促性腺激素α-HCG的單克隆抗體。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS

Cholesterol 25-hydroxylase|  H25oh| CH25H形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  可產生抗人卵巢癌的單克隆抗體。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS

DAB1|Disabled homolog 1形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  可產生抗P815erbB-1的單克隆抗體。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS

ABCA1|ATP-binding cassette transporter A1|ABC1|CERP|HDLDT1|TGD|ABC-1|ATP-binding cassette 1|ATP-binding cassette transporter 1|ATP-binding cassette|sub-family A|member 1|Cholesterol efflux regulatory protein|membrane-bound|TGDATP-binding cassette sub-family A member 1形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  可產生抗P815erbB-2的單克隆抗體。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS