參數規格：

產品名稱：轉基因品系棉花COT102探針法qPCR試劑盒
貨號:CP97077
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

以下是轉基因品系棉花COT102探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
anti- ADM2 antibody資源名稱法國蜜環菌（斜面）種屬:Armillaria gallica提供形式:斜面培養物/凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:研究；生產。食用，藥用。培養方法培養基:綜合PDA：馬鈴薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，KH2PO4 3.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，維生素B1 微量，瓊脂 15.0g，pH6.0。生長條件:25-28℃，好氧

anti- ADNP antibody資源名稱擴展青霉（斜面）種屬:Penicillium expansum分離基物:水果提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes培養方法培養基:麥芽膏瓊脂：麥芽膏 20.0g，瓊脂 20.0g，自來水 1.0L，自然pH。121℃，15min。生長條件:25℃，好氧

anti- ADO antibody資源名稱淡紫擬青霉（斜面）種屬:Paecilomyces lilacinus提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:脂肪合成。培養方法培養基:綜合PDA：20%馬鈴薯汁1L，葡萄糖20g ，KH2PO4 3g， MgSO4.7H2O 1.5g，硫胺素微量，瓊脂 15g，pH 自然，121℃，15min。生長條件:28℃，好氧

anti- ADPGK antibody資源名稱腐生葡萄球菌腐生亞種種屬:Staphylococcus saprophyticus subsp. saprophyticus提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:研究、質量控制培養方法培養基:營養肉汁瓊脂：牛膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:37℃，好氧

anti- ADRA1A-Specific antibody資源名稱串珠鐮刀菌（斜面）種屬:Fusarium moniliforme分離基物:野燕麥提供形式:斜面安全等級:1模式菌株:no應用領域:檢測抗真菌性能。培養方法培養基:綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3g，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。

anti- ADRA1B antibody資源名稱緩慢葡萄球菌種屬:Staphylococcus lentus提供形式:凍干物安全等級:2模式菌株:no應用領域:《消毒技術規范》規定的空氣消毒鑒定的代表菌種, 表皮葡萄球菌8032。培養方法培養基:營養肉汁瓊脂：牛膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:37℃，好氧

anti- ADRA2B-Specific antibody資源名稱食酸菌屬種屬:Acidovorax sp.分離基物:西沙諾尼成熟果種子內提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:LB培養基:：酵母提取物 5.0 g 蛋白胨 10.0 g NaCl 10.0 g 瓊脂 15.0 g 蒸餾水 1.0 L pH 7.0，121℃ 15min。生長條件:28℃，好氧

anti- ADRB2 antibody資源名稱噬瓊膠海水菌種屬:Aquimarina agarlyticus sp. nov.分離基物:石花菜提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:yes培養方法培養基:細菌用海洋液體培養基:2216E：酵母膏 1.0g，蛋白胨 5.0g，Fe(III) citrate 0.1g，NaCl 19.45g，MgCl2 5.9g，KCl 0.55g，Na2SO4 3.24g，CaCl2 1.80g，Na2CO3 0.16g，KBr 0.08g，SrCl2 34.0mg，H3BO3 22.0mg，NaSiO3 4.0mg，NaF 2.4g，NH4NO3 1.6mg，Na2HPO4 8mg，蒸餾水 1.0L，pH7.6。121℃，15min。生長條件:28℃，好氧

anti- Adrenomedullin antibody資源名稱梭形芽孢桿菌屬種屬:Lysinibacillus│sp.分離基物:變味的醋提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:CM0002生長條件:30℃

anti- ADRM1 antibody資源名稱枯草芽孢桿菌黑色變種種屬:Bacillus│subtilis var. niger提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:防霉、抗菌。培養方法培養基:CM0002生長條件:28℃

anti- ADRP antibody資源名稱球毛殼（斜面）種屬:Chaetomium globosum提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:防霉抗菌。培養方法培養基:綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3g，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長條件:28℃，好氧

anti- ADRP/Perilipin 2 antibody資源名稱腸沙門氏菌腸亞種嬰兒血清型種屬:Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis提供形式:凍干物安全等級:2模式菌株:no應用領域:研究、質量控制培養方法培養基:營養肉汁瓊脂：膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:36℃，好氧

anti- ADSS antibody資源名稱野油菜黃單胞菌種屬:Xanthomonas campestris提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:黃原膠生產菌。培養方法培養基:營養肉汁瓊脂：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產生芽孢。生長條件:30℃，好氧

anti- Advillin antibody資源名稱鼠乳桿菌種屬:Lactobacillus murinus分離基物:小鼠腸道提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:潛在益生菌培養方法培養基:CM0006

anti- AEBP2 antibody資源名稱致病性大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli EPEC 026:K60分離基物:烤串提供形式:凍干物安全等級:2模式菌株:no應用領域:研究、質量控制。培養方法培養基:NB

anti- AEBP2 antibody資源名稱假單胞桿菌種屬:Pseudomonas spices提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:營養肉汁瓊脂：膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產生芽孢。pH7.0。121℃，15min。生長條件:28℃，好氧，24-48h

anti- AEG-1/MTDH-Specific antibody資源名稱雪腐鐮刀菌（斜面）種屬:Fusarium nivale分離基物:雪腐病小麥提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no培養方法培養基:綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3g，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。生長條件:25~28℃，好氧

anti- AF-6 antibody資源名稱林肯鏈霉菌種屬:Streptomyceslincolnensis分離基物:土壤安全等級:1模式菌株:no應用領域:產林可霉素培養方法培養基:158生長條件:26℃
轉基因品系棉花COT102探針法qPCR試劑盒小鼠 IGF-2 Bovine GHRL(Ghrelin) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠IGF-1R Bovine IGF-1(Insulin-like growth factor 1) ELISA Kit0.469ng/ml0.781-50ng/ml

小鼠 IGF-1 Bovine TLR2(Toll like receptor 2) ELISA Kit0.938ng/ml1.563-100ng/ml

小鼠 ISR-β Bovine TRY(Trypsin) ELISA Kit1.875ng/ml3.125-200ng/ml

小鼠 IDE Bovine PDGFB(platelet-derived growth factor-BB) ELISA Kit28.125pg/ml46.875-3000pg/ml

小鼠 INS Bovine IFNAR1(Interferon alpha/beta receptor 1) ELISA Kit0.188ng/ml0.313-20ng/ml

小鼠 TAP Bovine IL-10(Interleukin 10) ELISA Kit9.375pg/ml15.625-1000pg/ml