參數規格：

產品名稱：轉基因品系大豆DP356043探針法qPCR試劑盒
貨號:CP96960
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

以下是轉基因品系大豆DP356043探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
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Human IRAK3(Interleukin-1 receptor-associated kinase 3) ELISA Kit資源名稱膝曲彎孢種屬:Curvularia│geniculata提供形式:斜面培養物

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Human DHFR(Dihydrofolate reductase) ELISA Kit資源名稱稻梨孢（稻瘟病菌）（不提供）種屬:Pyricularia│oryzae提供形式:斜面培養物

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Human UBQLN1(Ubiquilin-1) ELISA Kit資源名稱尖鐮孢古巴專化型（香蕉枯萎病菌）種屬:Fusarium│oxysporum f. sp. cubense提供形式:斜面培養物

Human NFKB2(Nuclear factor NF-kappa-B p100 subunit) ELISA Kit資源名稱葡萄座腔菌（蘋果干腐病菌）種屬:Botryosphaeria│dothidea提供形式:斜面培養物

Human APOC4(Apolipoprotein C-IV) ELISA Kit資源名稱顆粒墊殼孢（石榴干腐病菌）種屬:Coniella│granati提供形式:斜面培養物

Human CCDC82(Coiled-coil domain-containing protein 82) ELISA Kit資源名稱灰色產色鏈霉菌種屬:Streptomyces│griseochromogenes分離基物:土壤

Human HMGN1(Non-histone chromosomal protein HMG-14) ELISA Kit資源名稱小金色鏈霉菌種屬:Streptomyces│microaureus分離基物:土壤

Human IGIP(IgA-inducing protein homolog) ELISA Kit資源名稱密蘇里游動放線菌種屬:Actinoplanes│missourieneis分離基物:土壤表層5-10cm處

Human STS(Steryl-sulfatase) ELISA Kit資源名稱微白黃鏈霉菌種屬:Streptomyces│albidoflavus提供形式:斜面培養物

Human S100A2(Protein S100-A2) ELISA Kit資源名稱黃質產色鏈霉菌種屬:Streptomyces│xanthochromogenes分離基物:土壤

Human CCT8L1P(Putative T-complex protein 1 subunit theta-like 1) ELISA Kit資源名稱婁徹氏鏈霉菌種屬:Streptomyces│rochei分離基物:土壤

Human HMMR(Hyaluronan mediated motility receptor) ELISA Kit資源名稱韋臘鏈霉菌種屬:Streptomyces│werraensis分離基物:土壤
轉基因品系大豆DP356043探針法qPCR試劑盒OxLDL(Oxidized low-density lipoprotein)形態特性  上皮樣細胞生長特性 貼壁生長特征特性   培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優質胎牛血清，10%

NRN1|NRN(Neuritin)|neuritin 1形態特性  上皮樣；圓形、成團　生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞系由Lasfargues E和 Coutinho WG建立，源于一名60歲患有浸潤性導管癌的白人女性的實體瘤。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%；10ug/ml 人重組insulin

MYOCD|MYCD(Myocardin)|BSAC2A|MYCD|MYOCD|Srfcp|形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  HTLV-1感染 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%

MITF|BHLHE32(Microphthalmia-associated transcription factor)|MI|WS2A|Waardenburg syndrome|type 2A|Class E basic helix-loop-helix protein 32形態特性  骨髓瘤細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性   培養條件  IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  新生牛血清，20%

MDH2(Malate dehydrogenase|mitochondrial)形態特性  上皮樣生長特性 貼壁生長特征特性   培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10% FBS

LMAN2|C5orf8|VIP36|Vesicular integral-membrane protein 36|Glycoprotein GP36b|Lectin mannose-binding 2形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  不分泌免疫球蛋白,HAT敏感. 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%

GDF5|BMP-14|CDMP-1|BMP14|Cartilage-derived morphogenetic protein 1|cartilage-derived morphogenetic protein-1|CDMP1LAP4|GDF-5|growth differentiation factor 5|growth|differentiation factor 5|OS5|Radotermin|radotermin|SYNS2形態特性  上皮樣細胞生長特性 貼壁生長特征特性  這株細胞來源于一個淋巴結轉移。 患者接受了初期放療。 細胞均一性的部分缺失p53蛋白，并缺少p53蛋白表達。 細胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不合成促胃液釋放肽(GRP)。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優質胎牛血清，10%

MMP-17|MMP17|MT4-MMP|matrix metallopeptidase 17(membrane-inserted)|matrix metalloproteinase-17|membrane-type matrix metalloproteinase 4|membrane-type-4 matrix metalloproteinase|MT4MMP|MT-MMP 4|MTMMP4形態特性  淋巴母細胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  該細胞來源于一位3歲的白人Burkitt淋巴瘤患者；EBV陰性；表達IL-4受體和低親和性IgE受體（CD23）；每個細胞表面大約有1500個IL-4的結合位點；分泌IgM（lamda L）；表達膜型和分泌型的免疫球蛋白。 培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS