參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆A5547-127探針法qPCR試劑盒
貨號(hào):CP96954
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照。
PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆A5547-127探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human RSPO1(R-spondin-1) ELISA Kit資源名稱貪銅菌種屬:Cupriavidus│basilensis分離基物:laboratory fixed-bed reactor

Human RUVBL1(RuvB-like 1) ELISA Kit資源名稱全食副球菌種屬:Paracoccus│pantotrophus提供形式:凍干物

Human SAE1(SUMO-activating enzyme subunit 1) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)酶溶桿菌產(chǎn)酶亞種種屬:Lysobacter enzymogenes subsp. enzymogenes分離基物:土壤

Human SIVA1(Apoptosis regulatory protein Siva) ELISA Kit資源名稱生脂固氮螺菌種屬:Azospirillum│lipoferum提供形式:凍干物

Human SMC4(Structural maintenance of chromosomes protein 4) ELISA Kit資源名稱保加利亞乳桿菌種屬:Lactobacillus│bulgaricus提供形式:凍干物

Human SIK2(Serine/threonine-protein kinase SIK2) ELISA Kit資源名稱褐色綠僵菌種屬:Metarhizium│brunneum提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human SORBS1(Sorbin and SH3 domain-containing protein 1) ELISA Kit資源名稱桑格利娜氏鏈霉菌種屬:Streptomyces│sanglieri提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human SPOCK2(Testican-2) ELISA Kit資源名稱葡萄牙鏈霉菌種屬:Streptomyces│lusitanus提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human ST6GAL1(Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 1) ELISA Kit資源名稱微紅黃色粘球菌(橙色粘球菌)種屬:Myxococcus│fulvus提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human SWAP70(Switch-associated protein 70) ELISA Kit資源名稱高溫單孢菌種屬:Thermomonspora│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human TARBP2(RISC-loading complex subunit TARBP2) ELISA Kit資源名稱淡色叢赤殼（斜面）種屬:Bionectria ochroleuca提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human TBC1D1(TBC1 domain family member 1) ELISA Kit資源名稱榆干側(cè)耳種屬:Pleurotus│ulmarius提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human TBPL1(TATA box-binding protein-like protein 1) ELISA Kit資源名稱綿皮臥孔菌種屬:Poria│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human DRAM1(DNA damage-regulated autophagy modulator protein 1) ELISA Kit資源名稱密環(huán)菌種屬:Armillariella│mellea提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human MBOAT4(Ghrelin O-acyltransferase) ELISA Kit資源名稱嗜金屬熱厭氧桿菌（00開頭的農(nóng)業(yè)均無法提供）種屬:Thermoanaerobacter│siderophilus分離基物:油田采出水

Human LRP5(Low-density lipoprotein receptor-related protein 5) ELISA Kit資源名稱皮爾瑞俄類芽孢桿菌種屬:Paenibacillus│peoriae分離基物:土壤樣品

Human ATP13A2(Probable cation-transporting ATPase 13A2) ELISA Kit資源名稱飼料類芽胞桿菌種屬:Paenibacillus│pabuli分離基物:石油污染土

Human DNAJC27(DnaJ homolog subfamily C member 27) ELISA Kit資源名稱壁畫枝芽胞桿菌種屬:Virgibacillus│picturae分離基物:土壤樣品

Human MSMB(Beta-microseminoprotein) ELISA Kit資源名稱戈氏紅球菌種屬:Rhodococcus│gordoniae分離基物:土壤

Human RSAD2(Radical S-adenosyl methionine domain-containing protein 2) ELISA Kit資源名稱食微囊藻素鞘氨醇胞菌種屬:Sphingosinicella│microcystinivorans分離基物:土壤
轉(zhuǎn)基因品系大豆A5547-127探針法qPCR試劑盒GDF11(Growth Differentiation Factor 11)|BMP?11|GDF-11形態(tài)特性  圓形生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MKN45細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  20%FBS；400ug/ml G418　

FABP5(Fatty Acid Binding Protein 5|Epidermal )|E?FABP|EFABP|fatty acid binding protein 5(psoriasis-associated)|Fatty acid-binding protein 5|PA-FABPepidermal|Psoriasis-associated fatty acid-binding protein homolog形態(tài)特性  上皮樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418　

PFN2|Profilin-2|Profilin II形態(tài)特性  上皮樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418　

NCOR1|N-CoR|N-CoR1|TRAC1|hN-CoR|nuclear receptor corepressor 1|nuclear receptor co-repressor 1形態(tài)特性  上皮樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418　

NDN|Necdin形態(tài)特性  上皮樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418　

HNRNPK|HNRPK|Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K|Transformation up-regulated nuclear protein|TUNP形態(tài)特性  上皮樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418　

DEFB1|Beta-defensin 1|BD1|HBD1|BD-1|hBD-1|Defensin Beta 1形態(tài)特性  上皮樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418　

FUT6|FCT3A|Alpha-(1|3)-fucosyltransferase|Galactoside 3-L-fucosyltransferase|Fucosyltransferase 6|Fucosyltransferase VI|Fuc-TVI|FucT-VI形態(tài)特性  上皮樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使Hela細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418