參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系番茄1345-4探針法qPCR試劑盒
貨號(hào):CP96990
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

以下是轉(zhuǎn)基因品系番茄1345-4探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human PLTP(Phospholipid Transfer Protein) ELISA Kit資源名稱胡蘿卜軟腐病堅(jiān)固桿菌種屬:Pectobacterium carotovorum提供形式:凍干物

Human PLVAP(Plasmalemma Vesicle Associated Protein) ELISA Kit資源名稱伯頓畢赤酵母（斜面）種屬:Pichia burtonii提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human pTAU(phosphorylated microtubule-associated protein tau) ELISA Kit資源名稱中間硫桿菌種屬:Thiobacillus│intermedius分離基物:生物除臭塔

Human pNF-H(Phosphorylated Neurofilament H) ELISA Kit資源名稱草分枝桿菌種屬:Mycobacterium│phlei提供形式:凍干物

Human PP(Pepsin) ELISA Kit資源名稱茄科羅爾斯通氏菌種屬:Ralstonia│solanacearum提供形式:凍干物

Human PP13(Placental Protein13) ELISA Kit資源名稱加氏乳桿菌種屬:Lactobacillus gasseri提供形式:凍干物

Human PPAR-α(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit資源名稱唾液乳桿菌種屬:Lactobacillus salivarius提供形式:凍干物

Human PPAR-γ(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit資源名稱多形擬桿菌種屬:Bacteroides thetaiotaomicron分離基物:人臉

Human PPOX(Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit資源名稱格利菲斯瓦爾德鎮(zhèn)磁螺菌種屬:Magnetospirillum│gryphiswaldense分離基物:river sediment

Human PPP1R1A(Protein Phosphatase 1 Regulatory Subunit A) ELISA Kit資源名稱魯氏少根根霉種屬:Rhizopus arrhizus var. rouxii分離基物:酒曲

Human PRB1(Basic Salivary Proline Rich Protein 1) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)黑普雷沃氏菌種屬:Prevotella│melaninogenica分離基物:唾液

Human PRB2(Basic Salivary Proline Rich Protein 2) ELISA Kit資源名稱中華石花菌種屬:Mycogelidium│sinense分離基物:子實(shí)體組織

Human PRCP(Prolylcarboxypeptidase) ELISA Kit資源名稱紅色毛癬菌種屬:Trichophyton rubrum安全等級(jí):1

Human PRELP(Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit資源名稱乳酸桿菌種屬:Lactobacillus│分離基物:健康孕婦道分泌物

Human Preptin(Preptin) ELISA Kit資源名稱假堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌（暫無）種屬:Bacillus pseudofirmus提供形式:凍干物/斜面

Human PRKG1(Protein Kinase, cGMP Dependent Type I) ELISA Kit資源名稱戴氏菌種屬:Dyella│sp.分離基物:土壤

Human Pro-ADM(Proadrenomedullin) ELISA Kit資源名稱百日咳鮑特菌種屬:Bordetella pertussis提供形式:凍干粉

Human ProGRP(Pro-Gastrin Releasing Peptide) ELISA Kit資源名稱致病性大腸埃希菌種屬:Escherichia│coli提供形式:凍干物

Human pro-IL1β(pro interleukin 1 beta) ELISA Kit資源名稱熱纖梭菌種屬:Clostridium thermocellum提供形式:凍干物

Human Pro-MMP-1(pro-Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit資源名稱云芝栓孔菌（斜面）種屬:Trametes versicolor提供形式:斜面培養(yǎng)物
轉(zhuǎn)基因品系番茄1345-4探針法qPCR試劑盒WNT5A|hWNT5A(Protein Wnt-5a)|wingless-type MMTV integration site family|member 5A|WNT-5A protein形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

PTPRQ(Phosphotidylinositol phosphatase PTPRQ)|PTP-RQ|R-PTP-Q|Receptor-type tyrosine-protein phosphatase Q形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞屬藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

RALB|Ras related protein Ral B形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

VIM(Vimentin)形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣　生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞屬利保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 4|ATP-binding cassette sub-family C member 4|MRP/cMOAT-related ABC transporter|Multi-specific organic anion transporter B|MOAT-B|ABCC4|MRP4形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣　生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞屬藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

GTP binding protein smg p21B|K REV|RAL1B|RAP1B|Ras related protein Rap 1b形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 6|ATP-binding cassette sub-family C member 6|Anthracycline resistance-associated protein|Multi-specific organic anion transporter E|MOAT-E|ABCC6|ARA|MRP6形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 9|ATP-binding cassette sub-family C member 12|ABCC12|MRP9形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)、懸浮生長(zhǎng)均有特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS