使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數規格：

產品名稱：轉基因品系番茄331N染料法qPCR試劑盒
貨號:CP96992
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉基因品系番茄331N染料法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Human RB1(Retinoblastoma Protein 1) ELISA Kit資源名稱乙酰微小桿菌種屬:Exiguobacterium acetylicum分離基物:Creamy waste

Human RBP3(Retinol Binding Protein 3, Interstitial) ELISA Kit資源名稱金色鏈霉菌種屬:Streptomyces│aureus提供形式:凍干物

Human RCN1(Reticulocalbin 1) ELISA Kit資源名稱酸瘡痂鏈霉菌種屬:Streptomyces acidiscabies分離基物:馬鈴薯瘡痂

Human REG1α(RegeneRating Islet Derived Protein 1 Alpha) ELISA Kit資源名稱柯恩氏菌種屬:Cohnella│sp.分離基物:土壤

Human REG1β(RegeneRating Islet Derived Protein 1 Beta) ELISA Kit資源名稱臘狀芽孢桿菌種屬:Bcillus│cereus提供形式:凍干物

Human REPIN1(Replication Initiator 1) ELISA Kit資源名稱甲型副傷寒沙門菌種屬:Salmonella│paratyphi A分離基物:血

Human RIPK2(Receptor TNFRSF Interacting Serine Threonine Kinase 2) ELISA Kit資源名稱結核分枝桿菌種屬:Mycobacterium│tuberculosis提供形式:凍結物

Human RLN2(Relaxin-2) ELISA Kit資源名稱反芻雙歧桿菌種屬:Bifidobacterium│ruminantium分離基物:bovine rumen

Human RNASE(Ribonuclease) ELISA Kit資源名稱羅伊氏短芽孢桿菌種屬:Brevibacillus│reuszeri提供形式:凍干物

Human RNASEN(Ribonuclease III, Nuclear) ELISA Kit資源名稱藤倉赤霉原變種（斜面）種屬:Gibberella fujikuroi var. fujikuroi提供形式:只提供斜面

Human RNASET2(Ribonuclease T2) ELISA Kit資源名稱密粘褶菌（斜面）種屬:Gloeophyllum trabeum提供形式:斜面培養物

Human RPS6Kβ1(Ribosomal Protein S6 Kinase Beta 1) ELISA Kit資源名稱噬菌蛭弧菌種屬:Bdellovibrio│bacteriovorus分離基物:油藏采出液

Human rT3(Reverse Triiodothyronine) ELISA Kit資源名稱貝萊斯芽孢桿菌種屬:Bacillus│velezensis分離基物:土壤

Human RTN4(Reticulon 4) ELISA Kit資源名稱噬幾丁質菌種屬:Chitinophaga│sancti分離基物:土壤

Human RXFP1(Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit資源名稱淤泥假單胞菌種屬:Pseudomonas│caeni分離基物:厭氧氨氧化反應器的污泥

Human S100A13(S100 Calcium Binding Protein A13) ELISA Kit資源名稱黑柄炭角菌種屬:Xylaria│nignipes提供形式:凍干物

Human SAA2(Serum Amyloid A2) ELISA Kit資源名稱日本蟲草廣東變型種屬:Cordyceps│japonica f. guangdongensis提供形式:凍干物

Human Salusin α(Salusin Alpha) ELISA Kit資源名稱魚腥藍細菌種屬:Anabaena│sp.提供形式:斜面培養物

Human sCD14(Soluble Cluster of Differentiation14) ELISA Kit資源名稱隱藏嗜酸菌種屬:Acidiphilium│cryptumy1分離基物:生物除臭塔

Human TRACP-5b(TartRate-resistant Acid Phosphatase 5b) ELISA Kit資源名稱犬小孢子菌種屬:Microsporum│canis分離基物:皮膚組織
轉基因品系番茄331N染料法qPCR試劑盒HMGCR(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase)|HMG-CoA reductase形態特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

REDD1形態特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

IFI35(Interferon-induced 35 kDa protein)|IFP 35|Ifi-35形態特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

RGS1(Regulator of G-protein signaling 1)|1R20|BL34|IER1|B-cell activation protein BL34|Early response protein 1R20形態特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

RGS2形態特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

APOA1BP|AIBP|YJEFN1|YjeF_N1|AI-BP|YjeF N-terminal domain-containing protein 1|Apolipoprotein A-I-binding protein()|NAD(P)HX epimerase形態特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

RGS7形態特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

APOL1(Apolipoprotein L1)|APOL|Apo-L|ApoL-I|Apolipoprotein L|Apolipoprotein L-I形態特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS