實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數規格：

產品名稱：油菜內標準PEP基因PCR試劑盒
貨號:CP96925
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。

以下是油菜內標準PEP基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Human CYP3A5(Cytochrome P450 3A5) ELISA Kit資源名稱樺褐孔菌種屬:Inonotus│obliquus (Ach. ex Pers.) Pilat分離基物:菌核

Human FOXC2(Forkhead box protein C2) ELISA Kit資源名稱布氏白僵菌（卵孢白僵菌）種屬:Beauveria brongniartii (Sacc.) Petch分離基物:大黑腮金龜

Human DMGDH(Dimethylglycine dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit資源名稱紅發夫酵母種屬:Phaffia rhodozyma M.W. Mill. Yoney. & Soneda提供形式:凍干粉

Human CD42(Cluster of Differentiation 42) ELISA Kit資源名稱茄鏈格孢種屬:Alternaria│solani Sorauer分離基物:病葉

Human AIF1(Allograft inflammatory factor 1) ELISA Kit資源名稱茄鏈格孢（斜面）種屬:Alternaria solani Sorauer分離基物:馬鈴薯葉片

Human CUBN(Cubilin) ELISA Kit資源名稱雞樅(雞菌）種屬:Termitomyces│eurhizus (Berk.) R. Heim分離基物:子實體

Human BSN(Protein bassoon) ELISA Kit資源名稱蘋果黑腐皮殼菌（斜面）種屬:Valsa mali Miyabe & G. Yamada分離基物:蘋果樹樹皮

Human SLC14A1(Urea transporter 1) ELISA Kit資源名稱厚環粘蓋牛肝菌種屬:Suillus grevillei (Klotzsch) Singer分離基物:擔子果

Human PGK1(PhosphoglyceRate kinase 1) ELISA Kit資源名稱金龜子綠僵菌（斜面）種屬:Metarhizium anisopliae (Metschn.) Sorokīn分離基物:金龜子

Human Aadat(Kynurenine/alpha-aminoadipate aminotransferase, mitochondrial) ELISA Kit資源名稱黃色鐮刀菌種屬:Fusarium│culmorum (W.G. Sm.) Sacc.分離基物:落葵葉

Human AOPEP(Aminopeptidase O) ELISA Kit資源名稱蝙蝠蛾擬青霉菌種屬:Paecilomyces hepialus Chen & Dai分離基物:幼蟲

Human DEFA3(Neutrophil defensin 3) ELISA Kit資源名稱裂蹄木層孔菌種屬:Phellinus│linteus (Berk. & M.A. Curtis) Teng分離基物:枯立木

Human MMP26(Matrix metalloproteinase-26) ELISA Kit資源名稱交鏈孢屬種屬:Alternaria│sp.分離基物:丁香

Human DNASE1L3(Deoxyribonuclease gamma) ELISA Kit資源名稱#煙草節桿菌種屬:Arthrobacter│nicotianae Giovannozzi-Sermanni分離基物:葉片

Human GAD1(Glutamate decarboxylase 1) ELISA Kit資源名稱*槐耳種屬:Trametes│robiniophila Murrill提供形式:斜面培養物

Human MTRNR2L6(Humanin-like protein 6) ELISA Kit資源名稱堅強芽孢桿菌種屬:Bacillus│firmus Bredemann and Werner分離基物:根表

Human CDH7(Cadherin-7) ELISA Kit資源名稱核果褐腐病菌種屬:Monilinia laxa (Aderh. & Ruhland) Honey分離基物:自然發病果

Human PVALB(Parvalbumin alpha) ELISA Kit資源名稱短裙竹蓀1-2種屬:Dictyophora│duplicata (Bosc) E. Fisch.分離基物:毛竹林子實體

Human DPP9(Dipeptidyl peptidase 9) ELISA Kit資源名稱玉米大斑病菌種屬:Setosphaeria│tuicicum分離基物:葉片

Human DUOX1(Dual oxidase 1) ELISA Kit資源名稱桑黃種屬:Phellinus│igniarius (L.) Quél.分離基物:八月-05
油菜內標準PEP基因PCR試劑盒Myo(Myoglobin)|PVALB酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基(YPD)用途：用于酵母菌的培養，及供藥品和生物制品中含王漿和蜂蜜的合劑酵母菌數測定用。(《中華人民共和國藥典》2010年版)原理：

cTnI|TNNC1|CMD1FF|CMD2A|CMH7|RCM1|cTn-I|TNNI3沙氏葡萄糖瓊脂培養基用途：沙氏葡萄糖瓊脂培養基用于白色念珠菌的培養。(中華人民共和國藥典2010版、GB16294-2010)。原理：

NT-proBNP(N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide)沙氏葡萄糖肉湯培養基用途：沙氏葡萄糖肉湯培養基用于白色念珠菌的培養。(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

CKMB(Creatine Kinase MB Isoenzyme)|CK-MB沙氏液體培養基用途：沙氏液體培養基用于真菌的增菌培養，還用于一次性使用衛生用品真菌定性檢測(GB15979-2002)。原理：

GHRL(Ghrelin)|Obestatin沙氏瓊脂培養基用途：沙氏瓊脂培養基用于真菌的分離培養，還用于一次性使用衛生用品真菌菌落總數檢測(GB15979-2002)。原理：

EPO(Erythropoietin)|EP|MVCD2|Epoetin|Hematopoietin|Hemopoietin霉菌液體培養基用途：霉菌液體培養基用于霉菌、酵母的增菌和培養。原理：

αFP(Alpha-Fetoprotein)|AFP|FETA|HPAFP|oralpha fetal protein馬鈴薯瓊脂用途：馬鈴薯瓊脂用于霉菌的培養(GB/T4789.16-2003，GB/T4789.28-2003中4.79)。原理：

CA-125(Carbohydrate Antigen 125)|CA125|MUC16|Mucin 16馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA培養基)用途：馬鈴薯葡萄糖瓊脂用于供霉菌和酵母菌計數及分離培養(GB4789.15-2010和ISO標準)。原理：