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上海莼試生物技術有限公司
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水稻內標準gos9基因PCR試劑盒

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具體成交價以合同協議為準

產品型號50T

品       牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2020-06-12 13:31:32瀏覽次數:115次

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水稻內標準gos9基因PCR試劑盒在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
參數規格:

產品名稱:水稻內標準gos9基因PCR試劑盒
貨號:CP96895
產品規格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
運輸:低溫
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質粒載體上,構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數,計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值,即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質粒載體上,構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因,較佳地管家基因,優選地為RPPH1的擴增區域,其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題,提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為:待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數,計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值,即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴增區域,所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法,所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。

以下是水稻內標準gos9基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產品:
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Human RORC(Nuclear receptor ROR-gamma) ELISA Kit資源名稱粘質沙雷氏菌粘質亞種種屬:Serratiamarcescens安全等級:1

Human CNTF(Ciliary neurotrophic factor) ELISA Kit資源名稱紅串紅球菌種屬:Rhodococcuserythropolis分離基物:Internationalwaters,PacificOcean

Human FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit資源名稱乳酸乳球菌乳酸亞種種屬:Lactococcus lactis subsp. lactis提供形式:凍干物

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Human PDGFA(Platelet-derived growth factor subunit A) ELISA Kit資源名稱生孢梭菌種屬:Clostridium sporogenes提供形式:凍干粉

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Human TIE1(Tyrosine-protein kinase receptor Tie-1) ELISA Kit資源名稱粉紅單端孢霉種屬:Trichothecium roseum (Pers.) Link分離基物:蘋果果實

Human TNFRSF1A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A) ELISA Kit資源名稱皺褶青霉種屬:Penicillium│rugulosum分離基物:土壤

Human TNFRSF1B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B) ELISA Kit資源名稱里氏木霉種屬:Trichoderma reesei提供形式:凍干管,斜面培養物

Human GRN(Granulins) ELISA Kit資源名稱梨形毛霉種屬:Mucor│piriformis分離基物:豬糞

Human TNFSF10(Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand) ELISA Kit資源名稱粉紅寄生菌種屬:Hypomycesrosellus安全等級:1

Human AMH(Muellerian-inhibiting factor) ELISA Kit資源名稱短密青霉種屬:Penicillium│brevicompactum分離基物:沉積物/上覆水

Human APOC1(Apolipoprotein C-I) ELISA Kit資源名稱米黑根毛霉種屬:Rhizomucormiehei安全等級:1

Human APOH(Beta-2-glycoprotein 1) ELISA Kit資源名稱隱甲藻種屬:Crypthecodiniumcohnii分離基物:Macrocystissp.,PacificGrove,CA,1977

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水稻內標準gos9基因PCR試劑盒L-Lactate Dehydrogenase0.5%葡萄糖肉湯培養基用途:0.5%葡萄糖肉湯培養基用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查及消毒技術規范。(《中華人民共和國藥典》2010年版)原理:

FSH(Follicle-Stimulating Hormone)無菌試驗用真菌培養基【貨號、名稱、規格、產品形態及包裝形式】貨號規格名稱產品形態021044250g無菌試驗用真菌培養基脫水干粉【無菌試驗用真菌培養基用途】

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ALB|albumin|GIG42|HSA|PRO0883|PRO0903|PRO1341|PRO1708|PRO2044|PRO2619|PRO2675|Serum albumin|UNQ696|PRO1341胰蛋白胨生理鹽水溶液(TPS)產品規格:250g

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IL-10|IL10|IL10A|CSIF|TGIF明膠培養基(營養明膠)用途:明膠培養基供測定細菌液化明膠使用(GB15979-2002和GB/T4789.28-2003中3.10,GB/T4789.35-2003)。原理:

TNFα(Tumor Necrosis Factor Alpha)|TNF-α|DIF|TNF-alpha|TNFA|TNFSF2伊紅美藍瓊脂(EMB)用途:伊紅美藍瓊脂培養基(EMB)用于分離革蘭氏陰性腸道菌特別是大腸菌群和糞大腸菌群(GB/T4789.38-2008,GB15979-2002,SN0169-92,化妝品衛生規范2007版和GB5750.12-2006)。原理:

 

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