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使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數規格：

產品名稱：小麥內標準acc1基因PCR試劑盒
貨號:CP96907
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶（2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是小麥內標準acc1基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Human NAA20(N-alpha-acetyltransferase 20) ELISA Kit資源名稱指狀青霉種屬:Penicillium digitatum提供形式:凍干粉

Human HIF1AN(Hypoxia-inducible factor 1-alpha inhibitor) ELISA Kit資源名稱三線鐮孢菌種屬:Fusariumtricinctum安全等級:1

Human SOX9(Transcription factor SOX-9) ELISA Kit資源名稱干酪乳桿菌種屬:Lactobacillus│casei分離基物:牙洞

Human DPP10(Inactive dipeptidyl peptidase 10) ELISA Kit資源名稱Naxibactervarians種屬:Naxibactervarians分離基物:90歲男性眼睛，挪威

Human AMD1(S-adenosylmethionine decarboxylase proenzyme) ELISA Kit資源名稱Lysinibacillusxylanilyticus種屬:Lysinibacillusxylanilyticus分離基物:森林腐殖質，韓國雞龍山

Human SLC25A5(ADP/ATP translocase 2) ELISA Kit資源名稱菊糖芽孢乳桿菌種屬:Sporolactobacillus inulinus分離基物:雞飼料

Human NOTCH1(Neurogenic locus notch homolog protein 1) ELISA Kit資源名稱類紅紅細菌種屬:Catellibacteriumchanglense=Rhodobacterchanglensis安全等級:1

Human MIOX(Inositol oxygenase) ELISA Kit資源名稱牙齦卟啉單胞菌種屬:Porphyromonas gingivalis分離基物:人類齦溝

Human WISP3(WNT1-inducible-signaling pathway protein 3) ELISA Kit資源名稱匣狀粘球菌種屬:pyxidicoccusfallax安全等級:1

Human VKORC1(Vitamin K epoxide reductase complex subunit 1) ELISA Kit資源名稱孢囊桿菌種屬:CystobacterSP.安全等級:1

Human Carbamylated Albumin ELISA Kit資源名稱弱小珊瑚桿菌種屬:Corallococcusexiguous安全等級:1

Human UBQLN2(Ubiquilin-2) ELISA Kit資源名稱黃色粘球菌種屬:Myxococcusxanthus安全等級:1

Human GLRX3(Glutaredoxin-3) ELISA Kit資源名稱產堿假單胞菌種屬:Pseudomonasalcaligenes分離基物:游泳池水

Human TFAP2B(Transcription factor AP-2-beta) ELISA Kit資源名稱成團腸桿菌(成團泛菌)種屬:EnterobacteragglomeransEwingandFife安全等級:1

Human SULF2(Extracellular sulfatase Sulf-2) ELISA Kit資源名稱阪崎腸桿菌種屬:Enterobacter sakazakii提供形式:凍干粉

Human HBA1(Hemoglobin subunit alpha) ELISA Kit資源名稱棉花立枯菌種屬:Rhizoctoniasolani安全等級:1

Human STEAP1(Metalloreductase STEAP1) ELISA Kit資源名稱納地青霉種屬:Penicillium nalgiovense提供形式:凍干粉

Human PTTG2(Securin-2) ELISA Kit資源名稱香蕉枯萎病種屬:Fusariumoxysporum安全等級:1

Human PTTG1IP(Pituitary tumor-transforming gene 1 protein-interacting protein) ELISA Kit資源名稱蠟蚧輪枝孢菌種屬:Verticilliumlecanii安全等級:1

ApoB100(Apolipoprotein B100)|Apo-B100抗生素檢定培養基4號用途：抗生素檢定培養基4號用于兩性霉素B的效價及殘留的微生物學檢定(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

sCD163(Soluble Cluster of Differentiation 163)|M130|MM130抗生素檢定培養基3號用途：抗生素檢定培養基3號用于慶大霉素效價的微生物學檢定及藤黃八疊球菌菌懸液制備(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

CD169|SIGLEC1(Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 1)|Siglec?1|C19orf75|SIGLECL1 SIGLEC family like 1抗生素檢定培養基2號(高pH)用途：抗生素檢定培養基2號(高pH)用于磷霉素、大觀霉素、新霉素、羅紅霉素等效價及殘留的微生物學檢定(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

CD200(OX-2 membrane glycoprotein)|CD200|MOX1|MOX2|MRC|OX-2|antigen identified by monoclonal MRC OX-2|CD200 antigenMOX1|CD200 molecule|MOX2MRC|MRC OX-2 antigen|OX-2|OX-2 membrane glycoprotein抗生素檢定培養基2號(低pH)用途：抗生素檢定培養基2號(低pH)用于四環素、土霉素、金霉素、氯霉素、桿菌肽等的效價及殘留的微生物學檢定(中華人民共和國經典2010版)。原理：

CD21|CR2(Complement Receptor 2)抗生素檢定培養基1號(高pH)用途：抗生素檢定培養基1號(高pH)用于鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、紅霉素等效價及殘留的微生物學檢定(中華人民共和國藥典2010版)。原理：

PIVNP營養瓊脂培養基（藥典）用途：營養瓊脂培養基用于一般細菌總數測定，保存菌種及純培養。(《中華人民共和國藥典》2010年版)原理：