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使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆G94-1探針法qPCR試劑盒
貨號:CP96969
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶（2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆G94-1探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human CHRM2(Cholinergic Receptor, Muscarinic 2) ELISA Kit資源名稱堪薩斯分枝桿菌種屬:Mycobacterium│kansasii提供形式:凍干物

Human CK-13/KRT13(CytokeRatin 13) ELISA Kit資源名稱牛分枝桿菌牛型亞種種屬:Mycobacterium│Mycobacterium bovis subsp bovis提供形式:凍干物

Human CK-18/KRT18(CytokeRatin 18) ELISA Kit資源名稱龜分枝桿菌龜膿腫亞種種屬:Mycobacterium│chclonae subsp. Abscessus提供形式:凍干物

Human CK-20/KRT20(CytokeRatin 20) ELISA Kit資源名稱柯氏檸檬酸桿菌種屬:Citrobacter│koseri提供形式:凍干物

Human CKLF(Chemokine Like Factor) ELISA Kit資源名稱豬鼻支原體種屬:Mycoplasma│hyorhinis分離基物:豬呼吸道

Human CKLFSF6(Chemokine Like Factor Superfamily 6) ELISA Kit資源名稱犬傳染性肝炎病毒種屬:Mastaadenovirus│Infectious canine hepatitis virus分離基物:新生仔犬，肝

Human CKMT1A(Creatine Kinase, Mitochondrial 1A) ELISA Kit資源名稱胸膜肺炎放線桿菌種屬:Actinobacillus│pleuropneumoniae分離基物:病豬內(nèi)臟

Human CLDN1(Claudin 1) ELISA Kit資源名稱雞傷寒沙門氏菌種屬:Salmonella│gallinarum分離基物:肉雞盲腸

Human CLDN11(Claudin 11) ELISA Kit資源名稱Nakamurella lactea種屬:Nakamurella│lactea提供形式:凍干物

Human CLDN4(Claudin 4) ELISA Kit資源名稱Purpureocillium sp.種屬:Purpureocillium│sp.分離基物:土壤

Human CLDN5(Claudin 5) ELISA Kit資源名稱澳大利亞糖絲菌種屬:Sacchardthrix│australienis提供形式:凍干物

Human CLDN9(Claudin 9) ELISA Kit資源名稱大腸埃希氏菌DH5a/EcsecA N68種屬:Escherichia│coli提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CLL1(Collectin Liver 1) ELISA Kit資源名稱大腸埃希氏菌DH5a/T/TBsecA2種屬:Escherichia│coli提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CMLC-1(Cardiac Myosin Light Chains 1) ELISA Kit資源名稱黑粉菌屬種屬:Ustilago│sp.提供形式:凍干物

Human c-myc(c-myc Oncogene Product) ELISA Kit資源名稱紅螺菌屬菌種種屬:Phaeospirillum│sp.分離基物:土壤

Human CNR1(Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA Kit資源名稱啤酒酵母種屬:Saccharomyces│cerevisiae提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CNTN4(Contactin 4) ELISA Kit資源名稱茄病鐮刀菌藍色變種種屬:Fusarium│solani var.coeruleum分離基物:人參根部土壤

Human CNTNAP2(Contactin Associated Protein Like Protein 2) ELISA Kit資源名稱脅狀擬內(nèi)孢霉種屬:Endomycopsis│fibuliger提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CNX(Calnexin) ELISA Kit資源名稱須殼孢屬種屬:Pyrenochaeta│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human COL11α1(Collagen Type XI Alpha 1) ELISA Kit資源名稱芽枝孢霉屬種屬:Cladosporium│sp.分離基物:根
轉(zhuǎn)基因品系大豆G94-1探針法qPCR試劑盒MYB binding protein (P160) 1a|Myb binding protein 1A|MYBBP1A|P160|PAP2形態(tài)特性上皮樣生長特性貼壁生長特征特性培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清，10%

XOD(Xanthine Oxidase)|XDH|XDHA|Xanthine dehydrogenase|oxidase形態(tài)特性上皮細胞生長特性貼壁生長　特征特性 22RV1是來自異種移植(在閹割引起前列腺癌衰退又在其父親的雄性激素信賴型CWR22嫁接后復(fù)發(fā)的小鼠中連續(xù)傳代)的人前列腺癌上皮細胞系。此細胞系表達前列腺特異抗原。二羥基脂酮輕微刺激細胞生長，經(jīng)western blot檢測溶解產(chǎn)物與抗雄性激素受體抗體起免疫反應(yīng)。 EGF刺激細胞生長，但TGFβ-1不能抑制細胞生長。該細胞在裸鼠中成瘤。培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

FOXO3(Forkhead box protein O3)|AF6q21|FKHRL1|FKHRL1P2|FOXO3A|forkhead box O3|Forkhead in rhabdomyosarcoma-like 1形態(tài)特性上皮細胞生長特性貼壁生長特征特性 SW620是從一個51歲男性白人組織中分離得到。由A.Leibovitz等從一個淋巴結(jié)建株。細胞系主要由無絨毛的小園球細胞和雙極細胞組成。它僅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性。培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

hypothetical protein MGC29506| MZB1| PACAP| pERp1形態(tài)特性上皮樣生長特性貼壁生長特征特性該細胞系1957年由T.U.Sample等從患有結(jié)腸癌的70歲男性白人的腹水分離。該病人在取腹水樣品前已用5-氟尿嘧啶治療4-6周。角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

FOXO1(Forkhead Box Protein O1)|FKHR|FOXO1A|Forkhead box protein O1A|Forkhead in rhabdomyosarcoma|FKH1|forkhead box O1|forkhead homolog in rhabdomyosarcoma形態(tài)特性上皮細胞生長特性貼壁生長特征特性該細胞系來自8歲男性黑人的組織。其染色體模式數(shù)目為60，在裸鼠中能致瘤。已知該細胞系含有與人類疾病有關(guān)的因子，需在2級生物安全防護下操作。培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%